紫色作物花色苷的分离鉴定及抗病毒机理的初探

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花色苷作为水溶性色素广泛存在于紫色作物中,具体抗氧化、清除自由基、抗癌等重要生物活性,而其具有抗病毒功效未知,且相关研究较少。因此,本文尝试在体外研究紫色作物花色苷抗急性猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和慢性肿瘤禽白血病A亚群病毒(ALV-A)的作用,并在ALV-A介导鸡成纤维细胞(DF-1)的NFκB信号传导途径上,探索花色苷抗病毒的机理,对家禽病毒的防治具有重要意义。本研究以紫玉米苞叶为原料,通过乙醇提取法,获得紫玉米花色苷提取物。另外选取紫甘蓝、黑豆皮、黑加仑、接骨木、笃斯越桔、紫甘薯和心里美萝卜七种花色苷提取物为研究对象,采用pH示差法、HPLC-MS方法测定花色苷的纯度和结构。基于体外细胞模型,TGEV和ALV-A分别诱导ST和DF-1细胞病变,采用MTT和显微镜观察法测定紫色作物花色苷对两种病毒的抑制效果。同时,以紫玉米花色苷为例,依据NFκB信号传导途径的理论基础,采用Western Blot、EMSA等方法,在核酸和蛋白水平上探讨花色苷对ALV-A感染DF-1细胞后的NFκB p50/p65活性的影响。得出以下结论:(1)本文从紫玉米苞叶中提取到纯度为11.54%的花色苷,检测八种紫色作物中的主要花色苷组分研究显示:紫玉米、紫甘蓝、黑豆皮、黑加仑、接骨木、笃斯越桔的花色苷基本单元糖苷为矢车菊色素,而紫甘薯主要以芍药色素为主,心里美萝卜主要以天竺葵色素为主。(2)紫色作物花色苷在安全质量浓度范围内,抗TGEV病毒效果排序为:黑加仑>黑豆皮>接骨木>紫甘薯=紫玉米>紫甘蓝=心里美萝卜>笃斯越桔。单体花色苷抗TGEV效果为Cy-3-glc>Pg-3-glc。这些研究数据可为花色苷抗病毒效果提供明显直观的研究模型。(3)紫色作物花色苷在安全质量浓度范围内,抗ALV-A病毒效果排序为:黑加仑>黑豆皮=紫玉米>紫甘薯>接骨木>心里美萝卜=笃斯越桔>紫甘蓝。单体花色苷抗ALV-A效果:Pn-3-glc>Cy-3-glc>Pg-3-glc。这些研究数据可为探讨花色苷抗病毒效果提供肿瘤模型。(4)建立的肿瘤病毒模型显示,紫玉米花色苷可有效抑制ALV-A介导DF-1细胞的NFκBp50/p65活性,揭示花色苷抗ALV-A病毒机理。
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