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新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒引起的一种禽类急性、高度接触性传染病,该病发病急、致死率高,自1926年首次暴发于印尼的爪哇和英国的新城以来,该病已经传播到世界许多国家和地区,一直是危害养禽业发展的主要禽病之一,被OIE列为A类疫病,我国农业部将其列为一类疫病。NDV在分类地位上属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒属(Rubulavirus)的成员之一,为单股不分节段的负链RNA病毒。整个基因组长度约为15kb,包含6个功能基因:3′-NP-P-M-F-HN-L-5′,分别编码6个主要蛋白质(NP蛋白、P蛋白、M蛋白、F蛋白、HN蛋白和L蛋白)。目前国内外仍无有效药物和健全的方案来治疗此类疾病,接种新城疫疫苗仍是我国各地以及国外预防该类传染病暴发与流行的主要手段。本试验针对实验室保存的新城疫La Sota病毒株作为疫苗用生产种毒的血凝效价、病毒含量以及稳定性下降导致疫苗质量下降的现象,通过蚀斑纯化技术,结合终点稀释法对现有的疫苗用种毒进行连续纯化、筛选,选择蚀斑大小主要在1.0～2.0mm左右,出斑整齐、性状均一、产斑时间一致,均在接毒后60～72h产生大小均一的病毒蚀斑,连续蚀斑纯化三代后,采用极限稀释法,将稀释度最大且血凝效价较高的尿囊液作为传代接种物,继续终点稀释操作,连传五代后。最终得到一株血凝效价高、病毒含量高且稳定的疫苗用生产种毒,接种鸡胚死亡时间较集中,主要在96～117h死亡。该纯化株相对于原毒株,血凝价HA从9log2提高到11log2,鸡胚半数感染量(EID50)从10-9.1/0.1mL提高到10-9.5/0.1mL,且连续传代均较稳定。经血清学鉴定、分子生物学鉴定结果显示,该纯化株融合蛋白F基因与血凝素和神经氨酸酶的HN基因较原毒株同源性达到99.5%和98.6%,说明该纯化株仍为La Sota病毒株,并未在筛选传代的过程中发生变异。经免疫原性试验、安全试验和效力试验,结果表明:该纯化株安全性高、免疫原性好、效力强,对雏鸡无不良反应,符合《国家兽用生物制品规程》要求。试验鸡接种该纯化株疫苗后,能够有效抵抗新城疫强毒攻击,可作为候选疫苗株,为研制新型有效新城疫疫苗,更好地预防鸡新城疫的爆发,提供良好的种毒。