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背景代谢产物常常与药物的安全性和有效性密切相关,因此,创新药物在临床开发阶段,希望能尽早获得人体代谢产物数据,特别是血浆中代谢产物谱,以确定体循环中主要代谢产物,并与原形药物一同进行药动学评价。苏特替尼是一种新型的共价EGFR酪氨酸激酶抑制剂,目前已完成临床Ⅰ期研究,拟用于非小细胞肺癌的治疗。目的鉴定苏特替尼在肿瘤患者血浆中的主要代谢产物,并建立灵敏、准确的液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中苏特替尼及主要代谢物。探索全血及血浆中原形和主要代谢物的稳定性,为临床生物样品采集、储存提供可靠条件,将验证后的方法应用于马来酸苏特替尼胶囊的肿瘤患者药动学研究。方法利用UPLC-UV/Q-TOF-MS技术,鉴定肿瘤患者单次口服60 mg马来酸苏特替尼胶囊后血浆中代谢产物。建立LC-MS/MS法同时测定苏特替尼及主要代谢物,稳定同位素标记的d6-苏特替尼和d6-N-氧化苏特替尼作为内标,血浆样品经乙腈蛋白沉淀后,以乙腈-含0.01%氨水的2 mmol·L-1醋酸铵水溶液（57:43）为流动相,经Agilent XDB C18（4.6×50 mm,1.8μm）色谱柱分离。采用电喷雾电离源（ESI）,以多反应监测正离子模式监测。用于定量分析苏特替尼及其内标的离子对分别为440.2→367.1和446.2→367.1。用于定量分析苏特替尼N-氧化代谢物及其内标的离子对分别为456.3→396.2和462.3→396.2。结果受试者单次口服60 mg马来酸苏特替尼胶囊后血浆中除原形外共检测到11种代谢产物,主要代谢途径为N-氧化（M6-3）,其他代谢途径包括N-去烷基（M1）、N-双去甲基并甲酰化（M5）、单氧化（M6-1和M6-4）、炔基氧化成羧酸（M7）、氧化脱胺形成羧酸（M13）、双氧化（M14）、炔基氧化成羧酸并单氧化（M16）和谷胱甘肽结合（M22-1和M22-2）。同时测定血浆中苏特替尼和主要代谢物N-氧化苏特替尼线性范围0.50100 ng·mL-1,方法验证每一分析批相关系数（r）大于0.99,表明在此线性范围内线性良好。苏特替尼日内精密度小于3.9%,日间精密度小于5.4%,准确度在3.8%4.7%之间;N-氧化苏特替尼日内精密度小于4.0%,日间精密度小于6.2%,准确度在2.8%3.8%之间。血浆稳定性研究结果揭示,苏特替尼血浆样品室温放置6、19 h后浓度分别降低约29%和66%,UPLC/Q-TOF MS检测证明其在血浆中与人血清白蛋白（HSA）发生共价结合,且随温度上升,稳定性降低。N-氧化物血浆样品室温放置6、19 h稳定,N-氧化物血浆样品室温孵育2、8、24 h及37℃孵育2、8h未检测到共价结合物,而37℃孵育24 h检测到HSA共价结合物。与原形相比,N-氧化物蛋白共价结合程度明显降低,可能是由于O原子的引入,化合物的亲电性改变,与HSA结合口袋亲和力下降,同时O原子的引入改变了分子结构,空间位阻增大。因此,全血样品采集处理过程要保证在湿冰不超过2 h,血浆样品预处理要保持在湿冰不超过5 h或室温不超过2 h。肿瘤患者口服40-100 mg苏特替尼后,吸收迅速,平均达峰时间2.17 h,N-氧化代谢物平均达峰时间略有延迟为3 h。在4080 mg剂量范围内,苏特替尼的AUC0-t和Cmax随给药剂量增加而增加,基本与剂量成正比。代谢物血浆暴露量为原形药物的1.011.44倍。苏特替尼平均血浆消除半衰期16.6 h,主要代谢物N-氧化苏特替尼平均血浆消除半衰期16.0 h。结论首次对苏特替尼在肿瘤患者血浆中的代谢产物进行了鉴定,N-氧化苏特替尼是人体中主要代谢产物。建立了准确、灵敏的LC-MS/MS法同时测定人血浆中苏特替尼及其N-氧化物,进行了完整的方法学验证,并应用于马来酸苏特替尼临床试验的肿瘤患者药动学研究,N-氧化物的血浆暴露量明显高于临床前安全性评价种属中的暴露量,提示临床应关注此代谢物对药物药效和安全性的影响。稳定性研究结果提示,临床样品采集及预处理应在低温条件下进行。