论文部分内容阅读
竹类植物是禾本科一个最大的自然类群,在经济、农业、环境中都发挥着巨大的作用。竹子分类是竹子研究中的突出问题之一,分子标记技术为竹子系统分类的深入开展提供了新的依据。EST-SSR是基于EST开发出的第二代分子标记。EST-SSR来自表达基因,与基因组SSR标记相比,具有物种间通用性较好、开发方法简单及成本低廉等优点。而且EST-SSR标记来自于基因的编码序列,更容易获得基因表达的信息。本研究通过NCBI和EMBL中的609条竹类EST序列进行比对和SSR搜索后设计引物,对16个属的39种竹类植物进行系统分类研究。获得以下主要结果:1、利用NCBI和EMBL中的609条竹类EST序列进行微卫星序列的筛选,共发现微卫星序列110个,占整个EST数据库的16.1%。SSR出现的频率是每3.34kb出现1个。其中二核苷酸重复序列62个,三核苷酸重复序列42个。二核苷酸重复序列中AC、CA、GT、TG丰度最高,三核苷酸重复以CTG丰度最高。2、根据得到的EST-SSR序列设计合成了35对引物,PCR扩增和银染检测表明,其中19个引物对在不同的竹类植物中显示出稳定清晰的带型共358条,扩增片段长度主要集中在200bp-400bp之间。引物有效率高达54.9%,可以作为竹子的新的EST-SSR分子标记。3、EST-SSR标记分析结果表明,16个属的39种竹类植物可以分为两大类群:丛生竹类群和散生竹类群。其中,丛生竹类群中各竹种的聚类结果与形态学分类基本一致;而散生竹类群中各竹种的聚类结果与形态学分类不完全吻合。我们认为:(1)刚竹属并非单系起源,在进化中形成了两个较大的分支;(2)支持传统分类中鹅毛竹与刚竹属亲缘关系近的观点;(3)在对月月竹归属众多的意见中,本实验结果倾向于认同月月竹归属方竹属;(4)对建立青篱属复合群的观点,本研究结果不支持狭义青篱竹属,同时认为其广义的概念也不准确;(5)四季竹和井冈寒竹这两个竹种在聚类图中处于比较特殊的位置,但由于其相关的研究较少,它们在竹子系统分类中的地位有待进一步的研究证实。