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目的:研究皮肤成纤维细胞中dystrophin mRNA和dystrophin的表达,探索应用皮肤成纤维细胞作为转化有遗传缺陷肌细胞研究时供体的可行性。方法:1、组织块法体外培养0～1日龄正常小白鼠皮肤成纤维细胞,待细胞爬满培养皿后除去组织块,用0.25%胰酶消化处理,按1:3传代。然后通过RT-PCR和Western blot技术分别检测经培养的小白鼠原代及第1～4代皮肤成纤维细胞中dystrophin mRNA及dystrophin的表达。2、将小白鼠骨骼肌、心脏、肝脏、肾脏和皮肤组织剪碎后放入液氮中研磨,然后加裂解液匀浆,最后通过RT-PCR和Western blot技术分别检测小白鼠各组织中dystrophin mRNA及dystrophin的表达。3、将小白鼠骨骼肌和皮肤组织剪碎放入液氮冻后再碾磨成细颗粒状,加入裂解缓冲液匀浆至不见组织块,最后通过PCR检测确认小白鼠皮肤成纤维细胞基因组DNA中含有dystrophin基因。结果:1、RT-PCR结果:(1)细胞水平上检测:小白鼠骨骼肌(阳性对照)经扩增,产物呈573bp的特异性DNA条带,而经培养的小白鼠原代及第1～4代皮肤成纤维细胞均没有扩增到任何条带。(2)组织水平上检测:小白鼠骨骼肌和心肌经扩增,产物呈573bp的特异性DNA条带,而小白鼠皮肤、肝脏和肾脏组织均未扩增到任何条带。实验结果表明dystrophin mRNA在皮肤成纤维细胞中无表达。2、Western blot结果:(1)细胞水平上检测:小白鼠骨骼肌(阳性对照)出现了约427KD的特异性条带,而小白鼠原代及第1～4代皮肤成纤维细胞均没有出现反应条带。(2)组织水平上检测:小白鼠骨骼肌和心肌均出现了约427KD的特异性条带,而小白鼠皮肤、肝脏和肾脏组织均未出现反应条带。实验结果表明dystrophin在皮肤成纤维细胞中无表达。3、PCR结果:小白鼠骨骼肌和皮肤经扩增,产物呈331bp特异性DNA条带,表明皮肤成纤维细胞基因组DNA中包含dystrophin基因。结论:在采用细胞融合探讨遗传物质转移的实验中,皮肤成纤维细胞可作为转化有遗传缺陷肌细胞研究时的供体。