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第一章膀胱癌组织HER-1/HER-2的表达及其临床意义目的研究膀胱移行细胞癌中HER-1和HER-2的表达情况,探讨HER-1和HER-2的表达与肿瘤的分期、病理分级等临床参数的关系。方法采用免疫组化染色的方法研究56例膀胱移行细胞癌的手术肿瘤标本以及10例正常膀胱组织标本的HER-1和HER-2的表达,并进行分析研究HER-1和HER-2在膀胱肿瘤中的表达是否存在相关性,同时采用统计学分析HER-1和HER-2的表达与与肿瘤分期、病理分级等临床参数之间的关系结果56例膀胱移行细胞癌患者的HER-1表达阳性率为55.4%,明显高于正常膀胱组织中HER-1的阳性率(10%)；HER-2在膀胱肿瘤的表达阳性率为37.5%,也明显高于正常膀胱组织中HER-1的阳性率(0%)。HER-1和HER-2在膀胱癌组织中的表达为正相关性。HER-1在高分期肿瘤(T3-T4)中的阳性率显著高于低分期肿瘤(T1-T2)(67.6%vs.36.4%),在高分级肿瘤(G3)中的阳性率显著高于低分期肿瘤(G1-G2)(72.7%vs.30.4%),在复发者中的阳性率显著高于初发组(75.0%vs.29.2%)。HER-2在高分期肿瘤(T3-T4)中的阳性率显著高于低分期肿瘤(T1-T2)(52.9%vs.13.6%),在复发者中的阳性率显著高于初发组(53.1%vs.16.7%)。结论HER-1和HER-2均在膀胱移行细胞癌中表达异常增加,其两者的表达为正相关性。HER-1的表达与膀胱尿路上皮癌的临床分期、病理分级、肿瘤复发相关。HER-2的表达与膀胱尿路上皮癌的临床分期和肿瘤复发相关。第二章HER-1和HER-2双重酪氨酸激酶抑制剂Afatinib对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响目的研究Afatinib对T24细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法采用不同浓度的Afatinib (0,1,5,10,20umol/L)作用T24细胞,用MTT法研究Afatinib对T24细胞的增殖能力的影响；用流式细胞术(FCM)检测Afatinib对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响；用细胞粘附实验检测Afatinib对人膀胱癌T24细胞对FN粘附的影响；用Transwell实验研究Afatinib对T24细胞的侵袭能力的影响；同时用western blot检测了侵袭相关蛋白MMP-2与MMP-9表达及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达,通过检查ERK1/2和Akt探讨Afatinib作用于膀胱癌的机制。结果Afatinib对膀胱癌T24细胞的增殖能力有着抑制作用；对T24细胞有着促进凋亡的作用,并且能改变T24细胞Bcl-2与Bax蛋白含量之比；Afatinib对膀胱癌T24细胞的侵袭能力有着抑制的作用,能抑制T24细胞MMP-2及MMP-9蛋白的表达；Afatinib作用于膀胱癌T24细胞后,p-ERK1/2和p-Akt蛋白呈下降趋势,且呈剂量依赖性；而对T24细胞的t-ERK1/2和t-Akt蛋白无影响。结论Afatinib抑制了T24细胞的增殖和侵袭能力,促进了T24细胞的凋亡。第三章Afatinib对膀胱癌T24细胞顺铂化疗敏感性研究目的探讨Afatinib与顺铂联合应用于膀胱癌细胞的协同作用,并对其作用机制及耐药性进行初步探讨。方法先进行膀胱癌T24-ADM细胞的制备,用MTT法观察Afatinib联合顺铂对T24细胞增殖的抑制作用；分别用MTT法检测Afatinib作用前后顺铂对T24-ADM细胞增殖的抑制作用；PCR法检测Afatinib作用前后顺铂对T24-ADM细胞MDR-1基因mRNA的表达水平；用western-blot法检测Afatinib作用前后顺铂对T24-ADM细胞p-gp的表达水平。结果Afatinib和顺铂联合用药的T24细胞的增殖抑制率高于单用顺铂；顺铂对Afatinib作用后的T24-ADM细胞抑制率高于Afatinib作用前；经Afatinib作用后,mdr-1基因的表达和p-gp蛋白的水平都有下调。结论Afatinib与顺铂同时作用膀胱癌T24细胞时,两者在抑制T24细胞增殖上表现出协同作用,Afatinib作用后顺铂对于膀胱T24-ADM细胞的抑制率高于单独用顺铂的抑制率,Afatinib能够有效抑制mdr-1基因的表达和p-gp蛋白的水平。