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胰腺癌是世界上最具破坏性和致死率的消化道恶性肿瘤之一,发病率逐年增高,由于胰腺癌起病隐匿,早期缺乏特征性临床表现,导致早期诊断困难,大多数胰腺癌患者确诊时已经是晚期,丧失了手术治疗的最佳时机,并且放化疗对胰腺癌治疗效果欠佳,当前有效的免疫治疗手段匮乏,同时由于胰腺癌发病机制不明,疾病进展迅速,早期易发生转移,导致预后极差,5年生存率不足5%。因此,探索胰腺癌发生发展的相关分子机制,为临床进一步研究胰腺癌基因靶向治疗奠定基础显得尤为重要。肿瘤干细胞(CSCs)是指肿瘤细胞中极少数的处于分裂静止状态的未分化细胞,具有一定的自我更新能力,并且具有独特的可塑性、代谢能力以及增强的放化疗抵抗能力。研究表明,在胰腺癌中,胰腺癌干细胞(PCSCs)驱动了肿瘤的发生和发展,并且在肿瘤转移、复发以及耐药中起到了重要作用,胰腺癌高度恶性生物学行为可能由胰腺癌组织内的PCSCs所决定。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类200个以上核苷酸组成的不编码蛋白的RNA分子,多项研究表明lncRNA是胚胎发育、细胞代谢等多种细胞生物学行为中的关键调控因子,其异常表达与肿瘤的增殖、侵袭以及转移等行为密切相关。Linc-RoR是经典的长链非编码RNA,长度为2.6kb,是干细胞主要转录因子的重要靶点,被认为在肺癌、胃癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤中起到促进作用。目的:探究Linc-RoR对胰腺癌细胞干性的调节作用及其相关的分子生物学机制,为临床进一步研究胰腺癌基因靶向治疗奠定基础。方法:1、荧光定量PCR方法检测胰腺癌细胞株Pa Tu-8988、SW1990、Bx PC-3中Linc-RoR表达量;2、根据表达量高低,在表达Linc-RoR较低的胰腺癌细胞(SW1990、Bx PC-3)中转染pCDH-RoR质粒,在表达Linc-RoR相对较高的胰腺癌细胞(Pa Tu-8988、SW1990)中转染sh-RoR质粒,并验证转染效率;3、通过荧光定量PCR、Western blot法检测干性相关基因的表达以及干细胞成球4、实验等实验技术探讨Linc-RoR对胰腺癌细胞干性的调节作用;5、上调或下调胰腺癌细胞中Linc-RoR的表达,通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果:1、荧光定量PCR结果表明Linc-RoR在三种胰腺癌细胞中差异表达,其中Pa Tu-8988中Linc-RoR表达量最高,SW1990中Linc-RoR表达量相对较低,Bx PC-3中Linc-RoR表达量最低;2、成功在胰腺癌细胞Bx PC-3、SW1990中上调Linc-RoR表达,在SW1990、Pa Tu-8988中下调Linc-RoR表达;3、Linc-RoR参与调节胰腺癌细胞干性:3.1上调胰腺癌细胞中Linc-RoR表达,Western blot法检测干性相关基因的蛋白水平表达量明显增高;反之,下调胰腺癌细胞中Linc-RoR表达,干性相关基因的蛋白水平表达量明显降低;3.2上调胰腺癌细胞中Linc-RoR表达,荧光定量PCR法检测干性相关基因的m RNA水平表达量明显增高;反之,下调胰腺癌细胞中Linc-RoR表达,干性相关基因的m RNA水平表达量明显降低;3.3上调Linc-RoR表达量,胰腺癌细胞的干细胞成球能力明显高于对照;下调Linc-RoR表达量,胰腺癌细胞的干细胞成球能力明显下降。4、Linc-RoR通过调节Wnt/β-catenin信号通路调节胰腺癌细胞干性:4.1上调胰腺癌细胞中Linc-RoR表达,Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1、Met蛋白表达量显著升高,总的GSK-3β蛋白表达量变化不明显;4.2下调胰腺癌细胞中Linc-RoR表达,Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1、Met蛋白表达量明显减少,而总的GSK-3β蛋白表达量变化不明显。结论:1、Linc-RoR在不同胰腺癌细胞系中差异表达;2、Linc-RoR参与调节胰腺癌细胞干性,上调Linc-RoR表达可促进胰腺癌细胞干性,下调Linc-RoR表达可抑制胰腺癌细胞干性;3、Linc-RoR可通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进胰腺癌细胞干性。