酶传感器生化基础与免疫力指标量化研究

来源 :河北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:requst2009
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酶传感器将酶作为敏感元件,把酶催化反应过程中的物理或化学信号转化为电信号以检测被测物。由于反应的高效性与专一性,酶在生物传感器的研究中被应用广泛。本文通过对辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,简称HRP, EC 1.11.1.7)催化过氧化氢氧化苯酚的反应体系进行数值模拟,研究了酶传感器检测的生化基础。模拟得到:1)反应方程的求解必须考虑其刚性问题,对于刚性方程,应该使用ODE15S。2)催化反应中间复合物HRP-I与HRP-II随时间变化的动力学曲线,并能确定其存在的时间。3)多组不同浓度下的反应过程曲线,对比了不同浓度下的反应速率,结果表明数值模拟能有效的减少实验次数与缩短实验周期。温度和pH对酶传感器测量精度影响较大,为了减少酶传感器在实际测量中的误差,指明了当前研究中将温度和pH值两个相关因素单独考虑的局限性。准确得到综合考虑了不同温度、pH值条件下,聚硫堇和纳米金固定辣根过氧化物酶传感器响应电流的特征,结果表明:1)单因素离散试验点分析,不能准确得到酶传感器的最适工作条件。综合考虑温度和pH值,该酶传感器最适工作条件在40-45℃之间,最佳pH值在5.3-5.7之间;2)以温度、pH值与响应电流之间的函数关系作为传感器校正,以及实现线性化处理和非线性补偿电路的基础,能够提高酶传感器的测量精度,扩大使用范围。复合酶传感器可以对同一样品多个指标同时进行检测,对各单一指标进行处理以获得综合性指标。免疫力是由多指标共同表达的一个综合性指标,通过对中华米虾(Caridina denticulata sinensis)投喂硒含量分别为0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75(μg/g)的饲料,研究了硒对中华米虾体内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(Catalase, CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPX)等抗氧化酶活性的影响,并探讨了其可能的作用机制。结果表明:1)中华米虾体内抗氧化酶具有协同效应,并且对硒表现出明显的剂量效应;2)当饲料中添加硒浓度为0.44μg/g时,虾体内SOD、CAT的活性均为最高;当硒浓度为0.48μg/g时,GPX活性最高。分析了当前甲壳动物免疫力研究指标,指出目前对免疫力进行评判存在的两个缺陷:1)不能综合反映免疫力水平变化。2)采用不同评判指标得到的结论无法进行科学客观比较。在此基础上,定义了免疫力综合指数,规定了计算方法,明确了两种计算权重的步骤方法,即层次分析法和主成分分析法。通过对文献数据的实际计算,阐明了计算方法的具体步骤,得到了免疫力综合指数,以定量数据表明试验结果对免疫力的影响,为客观评价所采取的试验措施提供量化结果。
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