本研究以莆田汇龙食品有限公司提供的皱纹盘鲍内脏为实验材料,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶六种蛋白酶对其进行酶解,以多糖得率为指标,结果显示碱性蛋白酶酶解所得多糖得率最高,为6.66%。由单因素实验和正交实验,确定了碱性蛋白酶提取鲍鱼内脏多糖的最佳工艺条件。将得到的鲍鱼内脏粗多糖进行体外抗氧化活性测定,结果为1 00%清除羟自由基的鲍鱼内脏粗多糖浓度为9.6 mg/mL,还原能力A700,0.485为8.16 mg/mL,100%清除ABTS自由基浓度为7.5mg/mL,表明所得到的多糖具有较好的抗氧化活性。采用双酶解法以提高多糖含量,结果显示胃蛋白酶二次酶解所得多糖含量最高。测定其抗氧化活性,结果显示在三种抗氧化活性模型中胃蛋白酶酶解样品均具有很好的效果。进一步采用Sevage法和反复冻融法除蛋白、过氧化氢除色素等方法分离纯化得到了高纯度的鲍鱼内脏多糖(AVP)。分离纯化得到的AVP,紫外光谱扫描结果显示其含有特征的多糖峰和一个蛋白峰,红外光谱结果显示其含有多糖特征吸收峰,而且是含有硫酸根的硫酸化多糖。核磁检测结果显示其含有α和β型单体结构。化学成分测定显示其总糖含量为46.24 g/100g,己糖醛酸、硫酸根、氨基己糖、蛋白含量分别为17.44、16.96、0.59和1.64 g/100g,薄层层析结果显示其单糖组成主要为D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-葡萄糖醛酸。急性经口毒性试验结果表明为无毒。采用双层平板法测定AVP(6.25,12.5,25,50 mg/mL)的抑菌作用,结果表明,AVP对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌都具有很好的抑菌作用,对铜绿假单胞菌有一定的抑菌作用,对枯草芽孢杆菌无抑菌作用。测定AVP(20,40,60,80,100 μg/mL)对胃癌细胞MGC-803的增殖抑制作用,MTT结果表明,AVP处理MGC-803细胞24h的半抑制浓度为22.87±0.53 μg/mL,48 h的半抑制浓度为18.71±0.60μg/mL。倒置相差显微镜观察可见AVP处理细胞48h后,随着AVP浓度的增加,细胞分布逐渐变稀松,数量逐渐减少,细胞边缘变得粗糙,大量细胞变圆且皱缩严重。AO/EB染色法观察可见AVP处理后的细胞发出明亮黄、橘红光的细胞核数量显著增多,说明大量细胞发生了染色质凝集和细胞膜破损。细胞迁移能力实验显示其细胞迁移率随着药物浓度的增大逐渐降低。以上结果表明AVP可以诱导胃癌细胞MGC-803凋亡。而western blotting结果显示Bax/Bcl-2的比值增加,说明AVP可能通过促进线粒体膜电位的改变,进而激活下游的capase3,诱导细胞凋亡。同时,AVP对人正常胃细胞GES-1的增殖基本没有影响,表明无细胞毒性。因此,AVP具有抗氧化、抑菌和抑制胃癌细胞增殖的生理活性。