论文部分内容阅读
[目的]探讨藤黄酸对多种恶性血液病细胞株的作用和机制,以及藤黄酸对正常免疫细胞及造血干细胞功能的影响。[方法]以不同浓度(0、0.065、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml)藤黄酸处理Jurkat、Raji、RPMI8226、U266、HL-60、K562、K562/A02细胞株24h-72h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测藤黄酸对7种细胞株的增殖抑制作用；碘化丙啶(PI)染色分析检测细胞周期改变；采用Annexin V/PI双染法观察细胞形态并检测细胞的凋亡,JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)水平；流式细胞仪检测荧光素激活的细胞半胱氨酸蛋白酶Caspase3、Caspase 8、Caspase 9阳性细胞水平；流式微球技术检测慢性白血病BCR-ABL融合蛋白变化。采用MTT法检测藤黄酸对PHA及LPS诱导的健康人外周血中淋巴细胞增殖活性的影响,中性红染色法检测对健康人外周血中单核细胞吞噬功能的影响,CFU-GM半固体集落培养法检测对造血干细胞的集落形成能力的影响。[结果]1.藤黄酸体外对Jurkat、Raji、RPMI8226、U266、HL-60、K562、K562/A02等7种细胞株均具有不同程度的增殖抑制作用。K562／A02细胞(GA>2μg/ml)比k562细胞(GA>0.5μg/ml)需要更高的藤黄酸浓度才显示增殖抑制作用。藤黄酸对各种恶性血液病细胞株24h的IC50依次为：K562 2.23μg/ml; Raji 1.86μg/ml; Jurkat 1.35μg/ml; HL-60 0.68μg/ml; RPMI82260.52μg/ml; U2660.44μg/ml。藤黄酸0、0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml浓度对其中K562、Jurkat、Raji细胞周期动态随访3天统计学未见明显差异。2.藤黄酸作用于Jurkat、Raji、RPMI8226、U266、HL-60、K562等6种细胞株呈典型凋亡形态学改变。藤黄酸呈浓度依赖性增高上述所有细胞株的损伤线粒体跨膜电位(△Ψm)水平。藤黄酸2μg／ml作用24h、48h后,藤黄酸处理标本较对照标本激活的caspase 3、caspase 8、caspase 9阳性细胞比例均有不同程度幅度的升高。3.2.0μg/ml藤黄酸处理K562细胞24h后细胞中的BCR-ABL融合蛋白水平下降。4.藤黄酸体外对PHA诱导的正常淋巴细胞和LPS诱导的正常淋巴细胞的增殖有抑制作用且呈浓度依赖性。藤黄酸对正常单核细胞吞噬中性红染液的能力有抑制作用。藤黄酸对正常骨髓／外周血造血干细胞CFU-GM集落形成能力有抑制作用,低浓度范围时(<1μg/ml)对正常骨髓造血干细胞CFU-GM集落形成能力无影响。[结论]1.藤黄酸体外对多种恶性血液病细胞株具有不同程度的增殖抑制作用,其增殖抑制作用在部分细胞株并非通过特异的细胞周期阻滞来实现。2.藤黄酸体外对淋巴瘤、骨髓瘤、白血病细胞株均有不同程度的诱导凋亡作用,机理是通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导肿瘤细胞凋亡。3.藤黄酸体外对免疫细胞功能有一定程度的抑制效应,藤黄酸对正常骨髓／外周血造血干细胞功能有不同程度的抑制作用,低浓度时对骨髓干细胞功能无影响。