【摘 要】
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葡萄(Vitis vinifera L.)是世界普遍栽培的经济果树。随着我国乡村振兴的实施其经济价值日益凸显。葡萄在生产过程中容易受到真菌的侵染导致葡萄病害,降低果实品质及产量,影响经济收益。葡萄溃疡病(Botryosphaeria dieback)是最重要的病害之一,其中,最具致病力的是可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)。糖转运蛋白是调控植物对病原菌的免疫功能的关
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葡萄(Vitis vinifera L.)是世界普遍栽培的经济果树。随着我国乡村振兴的实施其经济价值日益凸显。葡萄在生产过程中容易受到真菌的侵染导致葡萄病害,降低果实品质及产量,影响经济收益。葡萄溃疡病(Botryosphaeria dieback)是最重要的病害之一,其中,最具致病力的是可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)。糖转运蛋白是调控植物对病原菌的免疫功能的关键,但迄今为止,葡萄中尚未发现其参与机体免疫的机制的报道。本研究旨在揭示寄主葡萄与L.theobromae互作途径中蔗糖转运蛋白发挥的作用,探究葡萄中蔗糖转运蛋白基因在抗病性方面的功能和参与葡萄抗病调控网络的方式,为葡萄溃疡病,尤其是可可毛色二孢菌的防治、抗病品种的培育提供新的思路和依据。主要研究结果如下:1.“无核白”葡萄SUC基因的克隆。通过生物信息学的分析发现其该家族蛋白拥有12个跨膜区,螺旋结构模型基本一致,与其他蔗糖转运蛋白亲缘关系较近,亚细胞定位于细胞膜上,符合蔗糖转运蛋白的性质。2.免疫相关因子诱导SUC基因的表达。“无核白”葡萄组培苗对4种激素和2种激发子的进行4种不同的激素:SA、Me JA、ACC、ABA,2种激发子:chitin、flg22以及对“夏黑”葡萄枝条进行可可毛色二孢菌的接种处理发现,三个基因对免疫反应相关因子均出现不同程度响应,参与葡萄对于可可毛色二孢菌侵染相关反应途径中。通过基因表达结果的比较可以看出VvSUC12基因在各种处理下的表达量峰值明显高于其他两个基因,推断该基因可能与葡萄植株抗病途径相关性更高。VvSUC27表现出较大的差异,可能具有不同于VvSUC11和VvSUC12的功能。3.VvSUC12基因功能验证。通过转基因技术将VvSUC12基因在烟草及葡萄愈伤组织中过表达,用葡萄愈伤组织接种可可毛色二孢菌后表现病原菌侵染程度降低,说明VvSUC12基因能够提高植株的抗病性。4.葡萄SUC基因上游相关Dof转录因子的筛选。通过酵母单杂交筛选出6个可能与VvSUC12基因启动子互作的Dof转录因子,酵母自激活验证转录因子VvDof19及VvDof22具有转录激活活性,接种后基因表达变化比较发现VvDof19与VvSUC12表达模式相似GUS活性检验证明VvDof19能够激活VvSUC12基因表达。
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