细胞是生命活动的基本单位,是展现活的生命状态全部特点的最小单元。一切生命的关键问题都要到细胞中去寻找。但是由于细胞体积微小,细胞内组分微量而复杂,涉及的生化反应非常迅速,使得细胞研究尤其是单个活细胞的研究具有很大的难度。酵母细胞作为单细胞水平上研究细胞生化过程的理想模型,与人类细胞有很多相似的方面,且酵母细胞操作相对容易,使得许多有关人类细胞的研究成果都是首先通过研究酵母细胞发现的。本文主要采用酵母细胞作为研究对象,利用荧光显微技术,并结合其它一些手段如原子力显微镜、扫描电镜、激光共聚焦显微镜以及一些生物实验技术对酵母细胞的一些生命活动进行研究,并发展一种新的、简单易行的固定方法对单个活酵母细胞进行动态成像研究。本论文的研究工作主要包括: ●Li~+和PEG在酵母细胞转化中作用的研究 目前使用最为普遍且最有效的完整酵母转化方法中包含有Li~-和PEG的使用。但是到目前为止,关于质粒DNA是如何进入酵母细胞以及Li~+和PEG在完整酵母转化过程中所起的作用仍然鲜见报道。本文采用荧光倒置显微镜、原子力显微镜,扫描电镜并结合转化效率实验,首次形象直观地观察到Li~+和PEG对酵母细胞的影响,并将质粒DNA在酵母细胞表面的结合与DNA进入酵母细胞复制表达两者直接联系起来,为酵母转化研究提供了一条新的思路。 ●糖修饰量子点在酵母细胞研究中的应用 量子点因具有独特的荧光纳米效应,正被广泛地作为一种新型的生物医学荧光探针应用于生物成像研究。本文采用三种不同多糖:壳聚糖、羧甲基壳聚糖和羧甲基甲壳素修饰的量子点与酿酒酵母细胞作用,发现带有不同电荷的多糖修饰的量子点与酵母细胞作用的情况也是各不相同的,并且还考察了不同浓度的NaCl溶液(即不同离子强度)对壳聚糖修饰量子点与酵母细胞作用的影响,发现不同浓度的NaCl溶液可以调控壳聚糖量子点在酵母细胞表面的结合量和量子点进入到酵母细胞内部的量。 ●荧光标记技术在单个酵母活细胞研究中的应用 单个活细胞的研究在整个细胞学研究中具有十分重要的意义。本文采用一种