抗体偶联物可以将治疗剂导向肿瘤相关抗原，既增加了治疗剂对肿瘤细胞的细胞毒作用，又降低了其对正常细胞的杀伤，所以一直是医药生物技术领域的研究热点。本实验室曾经将抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其小型化的Fab’片段与高效抗肿瘤抗生素力达霉素（LDM）偶联，并在小鼠实验性肝癌H22和小鼠结肠癌C26模型中取得了很好的治疗效果。但是旧的偶联方法产率低，所得偶联物是LDM 1位α-氨基或侧链ε-氨基的随机偶联物，寻找高产率，LDM位点特异的偶联方法，寻找合适的交联剂以发挥偶联物最大的治疗作用是迫切需要解决的问题。本研究在这些方面进行了探讨。 采用杂交瘤3G11细胞接种至BALB／c小鼠腹腔，获得3G11杂交瘤腹水，经辛酸—硫酸铵两步沉淀法纯化，还原型和非还原电泳结果提示可获得纯度为80～90％的单抗3G11。亲和层析进一步纯化获得单抗3G11。单抗抗体亚型检测的结果显示3G11为IgG1型抗体。 采用无花果蛋白酶（Ficin）在1 mM半胱氨酸，pH7.0，37℃条件下消化小鼠IgG1产生高产量的F（ab′）₂片段，测定单抗3G11和切割产生的F（ab′）₂亲和常数分别为1.3×10^-8M^-1和2.7×10^-8M^-1。F（ab′）₂与相关抗原保持良好的免疫反应性。 由于LDM烯二炔结构的发色团在340-350nm有特征吸收。为了确定偶联物中LDM的量，采用紫外全波长扫描的方法检测了游离LDM和3G11抗体的紫外光谱吸收的差别。结果表明LDM浓度和特征吸收的关系为C=1.4583×A₃₄₁-0.0068，抗体在341nm无吸收，所以可以通过测定A₃₄₁的值确定偶联物中LDM的量。 DNA断裂法分析LDM的稳定性结果显示1mg／ml LDM在4℃储存活力略有减退，长期储存至25天时ED₁₀由0.28μg／ml增加至1.05μg／ml，提示不能长期在4℃储存LDM。在-70℃储存1天解冻后ED₁₀由0.28μg／ml增加至0.43μg／ml，