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我们知道,卵母细胞的成熟包括两个过程,即核成熟和胞质成熟。核成熟是指第一次减数分裂的恢复,并最终排出第一极体;胞质成熟是指着床前胚胎发育能力获得的过程。卵母细胞发育能力是反应胞质成熟的最直接指标。葡萄糖在卵丘-卵母细胞复合体中有以下四种代谢途径:戊糖磷酸途径,糖酵解途径,多元醇途径和己糖胺生物合成途径,尤其以糖酵解和戊糖磷酸途径更加重要。目前之所以还没有人通过直接添加抑制剂来说明葡萄糖代谢与发育能力的关系,是因为添加葡萄糖代谢抑制剂后阻断了卵母细胞的核成熟,没有足够多的核成熟卵母细胞进行随后的发育实验。我们建立一种新的小鼠卵母细胞培养系统,加入葡萄糖代谢抑制剂后仍能获得足够多的核成熟卵母细胞,对其孤雌激活并检测发育能力,从而阐明体外成熟期间葡萄糖代谢对小鼠卵母细胞胞质成熟的影响。结果如下: 1)COCs在单独添加5.6mM葡萄糖的培养液中培养15h,卵母细胞的成熟率达到100%;添加0.56mM葡萄糖时,成熟率显著降至81.3%;不添加葡萄糖时,成熟率只有16.8%。 2)COCs在单独添加1.5mM乳酸钠培养液中培养15h,卵母细胞的成熟率为93.3%,添加0.5mM乳酸钠时,成熟率显著降至78.0%;0.25mM乳酸钠时,成熟率显著降至41.9%;不添加乳酸钠时,成熟率只有17.7%。 3)COCs在单独添加5.6mM葡萄糖培养液中培养后,卵母细胞经Srcl2激活后的囊胚发育率显著高于单独添加1.5mM乳酸钠或0.5mM乳酸钠时的水平,而与5.6mM葡萄糖联合0.5mM乳酸钠相比没有显著差异。 4)COCs在单独添加2mM丙酮酸钠培养基中培养后,卵母细胞的成熟率和经Srcl2激活后的各项发育指标均能达到5.6mM葡萄糖的水平。 5)COCs在添加5.6mM葡萄糖和0.5mM乳酸钠以及1.5μM Iodoacetate培养液中培养后,与不添加相比Iodoacetate,成熟率、激活率和4-细胞率没有显著差异,而桑椹胚率和囊胚率显著降低,其中囊胚率从33.2%降低到20.0%。 6)COCs在添加5.6mM葡萄糖和0.5mM乳酸钠以及150μM DHEA培养液中培养后,与不添加DHEA相比,成熟率、激活率和4-细胞率没有显著差异,而桑椹胚率和囊胚率显著降低,其中囊胚率从29.4%降低到11.6%。 7)COCs在添加2mM丙酮酸钠、0.025μM鱼藤酮培养液培养后,与不添加鱼藤酮相比,卵母细胞的成熟率、激活率、4-细胞率没有受到显著影响,而桑椹胚率和囊胚率都显著降低。 综上所述,体外成熟期间能量物质对小鼠卵母细胞核成熟是必需的;糖酵解途径被阻断后,在不影响卵母细胞的核成熟的情况下显著影响其胞质成熟,其中囊胚率降至对照组的60%左右;PPP途径被抑制后,核成熟和胞质成熟都受到显著影响,其中囊胚率降低至对照组的40%左右。故PPP途径比糖酵解途径在卵母细胞成熟中起的作用更大一些。本文通过利用一种新的成熟培养基首次证明了小鼠卵母细胞体外成熟期间葡萄糖代谢途径对胞质成熟起重要作用。