GGYJ含药血清对HSC-T6细胞增殖、TGF-β1分泌以及ECM降解作用的研究

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目的:观察广西桂郁金(GGYJ)含药血清对大鼠HSC-T6细胞增殖、HSC-T6细胞自身转化生长因子β1(TGF-β1)的分泌、以及对转化生长因子β1Ⅰ型受体(Tβ-RⅠ)、转化生长因子β1Ⅱ型受体(Tβ-RⅡ)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶-13(MMPs-13)、al(Ⅰ)胶原(aI-collagen) mRNA表达的影响,探讨GGYJ抗肝纤维化作用的分子机制。  方法:选择大鼠HSC-T6细胞株,分为高、中、低三个给药组(相当于成人每日用量的20倍、10倍、5倍),以及空白组和阴性组共5组,均取用5%、10%、20%三种浓度的含药血清,同时作用HSC-T6细胞24h、48h、72h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测GGYJ含药血清对HSC-T6细胞生长增殖的抑制作用;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测 GGYJ含药血清对HSC-T6细胞自身分泌TGF-β1表达的影响;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测分析GGYJ含药血清作用HSC-T6细胞后,其Tβ-RⅠ、Tβ-RⅡ、TIMP-1、MMPs-13、aI-collagen mRNA表达的变化。  结果:⑴ MTT检测结果:结果显示,正常大鼠血清能明显加速HSC-T6细胞的增殖,其抑制率随含药血清浓度的增加而降低,但无显著性差异。抑制率与含药血清作用时间不完全呈正相关性,其最好的作用浓度为10%,作用时间为48h。  ⑵ELISA检测结果:各含药血清组与正常大鼠血清组(空白血清组)比较,对TGF-β1无明显抑制作用;正常大鼠血清组与未加大鼠血清组(阴性组)比较,TGF-β1含量有显著的增加(P<0.01)。  ⑶RT-PCR检测结果:各目的基因的空白组相对表达量(目的基因光密度与β-actin的比值)与阴性组的比较,均有显著增加;其中 Tβ-RⅠ各给药组的相对表达量与空白组比较有抑制作用(P<0.01),但各处理组之间无显著性差异;Tβ-RⅡ给药组与空白组比较无明显抑制作用,各处理组之间无显著性差异;TIMP-1给药组与空白组比较有抑制作用(P<0.01),各处理组之间有显著差异(P<0.01);MMPs-13给药组与空白组比较有增加作用(P<0.05),各处理组之间无显著性差异;aI-collagen给药组与空白组比较有抑制作用(P<0.01),各处理组之间有显著差异(P<0.01)。  结论:体外实验中,GGYJ含药血清对HSC-T6细胞株的增殖有抑制作用;对 HSC-T6细胞自身分泌的TGF-β1无明显抑制作用;对 Tβ-RⅠ、TIMP-1、aI-collagen mRNA的表达均有抑制作用,同时可增加MMPs-13mRNA的表达,但对Tβ-RⅡ无明显抑制作用。其可能是通过作用于Tβ-RⅠ而影响 TGF-β1信号转导通路抑制 HSC-T6的增殖;通过影响MMPs-13、TIMP-1以及aI-collagen mRNA的表达而使细胞外基质(ECM)减少,从而抑制HSC活化增殖,发挥抗肝纤维化形成的效应。
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