多西他赛是提取自欧洲红豆杉的半合成紫杉烷化合物,是目前临床重要的化疗药物,对于治疗复发型卵巢癌,乳腺癌及非小细胞肺癌有效[1-2],但由于多西他赛在临床治疗中出现了很多如恶心,呕吐便血等胃肠反应或关节痛和肌肉痛及由骨髓抑制引起的中性粒细胞的减少等不良反应[3]。同时由于水溶性较差,市售多西他赛大多使用吐温80及13%的乙醇作为注射溶剂,吐温80会导致过敏反应或体液潴留等毒性反应[4],使其临床应用受限。目前报道了许多新剂型,包括脂质体[5-6],纳米乳剂[7-8]亚微乳[9-10]等。注射用多西他赛是研究者研制开发的抗癌药物多烯紫杉醇的一种新剂型,为多西他赛冻干粉针(赋形剂为羟丙基-β-环糊精、甘氨酸和甘露醇),提高了其溶解性,旨在解决上述提到的由原有剂型中吐温80带来的ADR。新剂型的不断开发就要求对多西他赛的测定方法更灵敏,快速,和稳定。本文旨在使用LC-MS/MS建立更为灵敏,快速的测定生物样品中多西他赛的方法,并研究本品与原剂型(多西他赛注射液)28天反复给药毒性试验的伴随毒代动力学、药代动力学和组织分布的比较。本试验建立了生物样品中多西他赛的LC-MS/MS测定方法。色谱柱使用安捷伦Eclipese XDB-C18 ( 4.6mm×200mm,1.8μm);流动相组成为甲醇(含0.1%甲酸):水(含0.1%甲酸;5%乙腈)=75:25(v/v)流速0.4mL/min。柱温30℃。选择电喷雾(ESI)电离源,喷雾电压4800V,温度300℃;选择紫杉醇为内标,多西他赛和内标紫杉醇检测的核质比(m/z)分别为830.3和876.3;选择性离子(SIM)方式检测m/z 830.3的碎片离子为m/z 304和549;m/z 876.3的碎片离子为m/z 308和591;选择m/z 304和m/z 308分别作为多西他赛和内标的定量离子;生物样品的处理采用乙醚两次萃取法。对方法学进行确证的结果表明,方法的专一性好,在2-500μg·L-1范围内呈线性,血浆药物浓度在5、50和500μg·L-1测定的日内精密度分别为8.1-10.9%、3.3-6.9%和2.4-5.8%,日间精密度分别为3.9%、7.0%和5.3%,回收率范围为89.2-101.1%。血浆样品在室温和4oC均稳定24h,在-18oC稳定72h;萃取吹干后样品在-80oC放置三个月仍然稳定。满足生物样品中多西他赛的测定要求,为进一步试验提供了基础。在比格犬重复给药4周静脉滴注注射用多西他赛的毒性试验中进行了伴随毒代动力学研究。应用经过确证的、可以检测原型药物的液相色谱-串联质谱方法测定了动物血浆中原制剂和新制剂药物的浓度,分析并对比了首末两次新制剂各剂量组之间以及新制剂与原制剂同等剂量时的暴露水平(Cmax和AUC)和体内平均驻留时间等参数。试验结果表明,无论是首次给药后还是末次给药后,各剂量组犬体内血浆多西他赛浓度的下降均呈现二项指数函数消除的特性,停止滴注后0～30 min消除较快,30 min之后血药浓度的下降速率放缓,给药后8小时血浆中还能检测出痕量的多西他赛。首次给药后,三个剂量Cmax比值为1:3.4:2.9(低:中:高),AUC比值为1:2.8:3.4(低:中:高),提示血浆药物暴露量基本随剂量升高成比例升高。末次给药后,三个剂量的Cmax比值为1:1.4:1.4(低:中:高),AUC比值为1:1.5:1.3(低:中:高),也提示血浆药物暴露量随剂量升高基本成比例升高。与首次给药相比,末次给药后,虽然低剂量组的AUC和Cmax显著增高,但是,中、高剂量组的动力学参数无显著性差别。因此认为,反复给药3次基本没有改变药物的动力学特征。无论是首次给药,还是末次给药,多西他赛注射液对照组的AUC约是同剂量注射用多西他赛的2倍左右,表明在相同剂量下,原制剂的全身暴露高于新制剂。采取双处理(two treatment)、两周期(two period)随机交叉的试验设计,观察了在相同剂量(1.0 mg·kg-1或2.5 mg·kg-1)下注射用多西他赛和原剂型多西他赛注射液在Beagle犬体内的药代动力学差异。结果发现,无论是1.0 mg·kg-1剂量组,还是2.5 mg·kg-1剂量组,注射用多西他赛的AUC和Cmax均显著低于多西他赛注射液,约低1倍多;而表观分布容积(Vd)则显著高于多西他赛注射液。结果表明,在相同剂量下,新剂型注射用多西他赛在血浆中的暴露低于原剂型注射用多西他赛在SD大鼠体内组织分布试验中选取12 mg·kg-1给药剂量观察了注射用多西他赛和对照制剂(多西他赛注射液)在大鼠体内分布的差异。结果发现,给药后5min,静脉注射注射用多西他赛的大部分被检脏器中多西他赛浓度高于静脉注射多西他赛注射液,尤其是体脂、心脏、脾脏、肺脏、肾脏和胃肠道;给药1h后,仍然是静脉注射注射用多西他赛的大部分被检脏器中多西他赛浓度高于静脉注射多西他赛注射液,但是,脾脏中多西他赛浓度低于对照制剂;至给药后4h,大部分被检脏器中多西他赛浓度趋于相同,但是,肺脏中多西他赛浓度仍然高于对照制剂。新剂型注射用多西他赛与对照品多西他赛注射液相比,血浆中的暴露较低,但组织中呈现较高浓度.。