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目的:通过研究坤灵丸对反复移植失败患者着床期子宫内膜内皮型一氧化氮合酶的表达及血管生成的影响,探讨内皮型一氧化氮合酶与反复移植失败患者子宫内膜容受性的关系,并探究反复移植失败患者胚胎种植失败的原因及坤灵丸改善反复移植失败患者子宫内膜容受性的机制。方法:选取冻胚移植的反复移植失败患者为反复移植失败组(120例),其中口服“坤灵丸”患者为治疗组(60例),未口服者为对照组(60例)。选取首次移植且妊娠的患者为妊娠组(42例),作为阳性对照。治疗组于预备周期排卵后7天获取子宫内膜。取内膜当日开始口服坤灵丸两个月,于第2个月经周期排卵后的相同时期再次吸取子宫内膜。对照组和妊娠组仅于预备周期排卵后7天吸取一次子宫内膜。分别采用RT-PCR和免疫组化技术检测子宫内膜eNOS的表达,并用免疫组化技术检测子宫内膜微血管密度(MVD)。结果:1.妊娠组和反复移植失败组一般资料相比,其年龄、不孕年限、BMI、基础FSH、基础LH比较均无统计学差异(P>0.05)。2.治疗组和对照组一般资料相比,其年龄、不孕年限、BMI、基础FSH、基础LH比较均无统计学差异(P>0.05)。3.妊娠组和反复移植失败组相比,妊娠组e NOS的mRNA表达(0.748±0.874 VS 0.293±0.105)、eNOS蛋白表达及MVD计数(15.860±4.519 VS 13.680±4.087)均显著高于反复移植失败组,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.对照组和治疗前相比,两组eNOS m RNA表达(0.285±0.098 VS 0.301±0.112)、eNOS蛋白表达及MVD计数(14.017±4.253 VS 13.350±3.922)均无统计学意义(P>0.05)。5.治疗后和治疗前相比,治疗后eNOS的mRNA表达(0.745±0.087 VS 0.301±0.112)、eNOS蛋白表达及MVD计数(15.767±4.204 VS 13.350±3.922)均显著高于治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.治疗组和对照组的临床资料相比,治疗组的胚胎种植率(43.20%VS 22.22%)及临床妊娠率(53.33%VS 35.0%)均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者移植日内膜厚度(10.77±2.05 VS 10.95±2.19)、移植胚胎级别及早期流产率(15.60%VS 14.30%)均无统计学差异(P>0.05)。7.Spearman秩相关分析显示,eNOS蛋白表达与MVD计数呈正相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.反复种植失败患者着床期eNOS的低表达可能是胚胎种植失败的原因之一,提高e NOS的表达可能是改善反复移植失败的有效途径。2.反复种植失败患者着床期MVD增加有助于改善妊娠结局,MVD或可成为预测临床结局的指标之一。3.坤灵丸可能通过提高反复种植失败患者着床期eNOS的表达和MVD,改善子宫内膜容受性,从而改善临床结局。