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本研究第一次对Rhodococcus sp.R04降解多氯联苯及对多氯联苯的脱氯能力进行了细致研究,并运用光谱,色谱方法对几中多氯联苯的降解过程进行追踪,分析表明Rhodococcus sp.R04是一株强的多氯联苯降解菌,多氯联苯的降解因其结构的不同,而产生了不同的降解效果。通过建立R04的质粒文库,从中筛选出含有2,3-二羟基联苯双加氧酶(BphC)的基因片段,序列比对表明该片段还含有2,3-二氢-2,3-二羟基联苯双加氧酶(BphB),2,3-二羟基联苯双加氧酶及联苯双加氧酶(BphA)。根据同源序列,用PCR的方法,本文作者获得了水解酶基因,水解酶基因与前面三个基因共同构成了多氯联苯上游降解酶系的一个完整的基因簇。与其它多氯联苯降解基因簇结构相比,R04基因簇是一个在结构上全新的基因簇。活性测定证明了得到的R04基因簇通过四步生物转化将联苯转化为苯甲酸,基因敲除表明,R04基因簇在多氯联苯降解中是必需。对多氯联苯降解酶系中的关键酶——两个2,3-二羟基联苯双加氧酶同工酶进行了纯化和性质研究,结果表明,2,3-二羟基联苯双加氧酶热诱导表达可以减少纯化步骤,提高酶活回收率,两个同工酶在热稳定性,最适温度及抑制剂对酶活的影响方面差别很大,BphC1是一新的具有Mononuclear ironprotein中心的耐高温2,3-二羟基联苯双加氧酶。两个2,3-二羟基联苯双加氧酶同工酶结构预测表明,他们具有相似的二级结构,BphC1是一个结构紧凑的球形蛋白,BphC2是一个结构较为松散的球形蛋白,它们都有一个由疏水氨基酸构成的活性中心口袋。从两个2,3-二羟基联苯双加氧酶模型及化学修饰得知,BphC1的4个半胱氨酸相互之间不形成二硫键,而且亚基之间也没有二硫键存在,BphC2虽只有一个半胱氨酸,但却在亚基之间形成了二硫键。虽然2,3-二羟基联苯双加氧酶模型是由结构预测得到,但是它却可以提供一些有价值的信息,为本文作者继续探讨2,3-二羟基联苯双加氧酶结构与功能的关系奠定了良好的基础。