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BHV-1是牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis, IBR)的病原,主要侵害呼吸系统、生殖系统、神经系统、眼结膜和胎儿,该病毒的免疫逃避和潜伏感染以及引起的持续性感染是控制IBR的主要障碍。TLR是近年来免疫反应研究中备受重视的跨膜信号转导蛋白,能够激活天然免疫并启动获得性免疫系统。TLR2和TLR9可介导宿主对疱疹病毒感染的天然免疫反应,本文将牛胚气管细胞(Bovine Embryo Tracheal Cells, EBTr)作为机体组织的非免疫细胞模型,从基因和蛋白水平探讨BHV-1感染对TLR2和TLR9表达的影响,并获得了以下结果。(1) RT-PCR检测EBTr细胞TLR1～10mRNA的表达模式,结果显示,EBTr细胞表达TLR1、2、3、4、6、7、9、10,而TLR5和TLR8的mRNA未被检测到。(2)建立了TaqMan荧光定量PCR方法,并检测BHV-1感染EBTr细胞6、12、24、48、72、96、120和144h后病毒的增殖规律。结果显示,BHV-1感染EBTr细胞后可产生明显的细胞病变,感染144h内病毒一直缓慢增殖,而且细胞形态变化与病毒生长曲线的走势吻合。(3)将EBTr细胞分为BHV-1攻毒组和对照组,分别在培养第6、12、24及48h时用优化建立的SYBR Green荧光定量PCR方法检测TLR2和TLR9mRNA表达量的变化,Western blot技术检测TLR2蛋白表达量的变化,实验内参为β-actin。结果显示,BHV-1在感染EBTr细胞的48h内,攻毒组TLR2mRNA和蛋白的相对表达量均高于对照组,且感染48h时与对照组的差异极显著(P<0.01),BHV-1感染能显著上调TLR2mRNA和蛋白的表达。攻毒组TLR9mRNA的相对表达量在感染EBTr细胞的48h内低于对照组,且24h和48h的差异极显著(P<0.01),BHV-1感染下调TLR9mRNA的表达。本试验结果表明,BHV-1感染EBTr细胞后可导致其表达TLR2和TLR9发生改变,为下一步研究TLR2和TLR9介导BHV-1在EBTr细胞中的的免疫机制奠定了基础。