【摘 要】
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茯砖茶属于六大茶类中的黑茶,近些年来其工艺不断改进,逐渐变成一种将黑毛茶经筛选分离、汽蒸、渥堆、压制定型、发花和干燥等工序制作成的一种后发酵茶,而茯砖茶特有的“发花”工艺,会使得其显示出与其它茶类完全不同的品质和风味。而在茯砖茶“发花”过程中起着至关重要作用的微生物-“金花菌”学名冠突散囊菌（Eurotium Cristatum,E.Cristatum）的研究目前相对较少,且一般聚焦于茯砖茶及冠突
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茯砖茶属于六大茶类中的黑茶,近些年来其工艺不断改进,逐渐变成一种将黑毛茶经筛选分离、汽蒸、渥堆、压制定型、发花和干燥等工序制作成的一种后发酵茶,而茯砖茶特有的“发花”工艺,会使得其显示出与其它茶类完全不同的品质和风味。而在茯砖茶“发花”过程中起着至关重要作用的微生物-“金花菌”学名冠突散囊菌（Eurotium Cristatum,E.Cristatum）的研究目前相对较少,且一般聚焦于茯砖茶及冠突散囊菌在降脂减肥等方面的功效,但E.Cristatum及其提取物中存在一些抗炎物质,对这些抗炎物质和E.Cristatum的抗炎活性研究相对较少。新的流行病学显示溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis,UC）在中国的发病率不断上升,然而西安及北方地区等茯砖茶产源地及消耗地UC发病率相比于南方城市如广州武汉等约为其1/4至1/5。本研究以冠突散囊菌为研究材料,进行培养后提取菌落及其胞内多糖,以健康的雄性C57BL/6J小鼠作为实验动物,葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulphate Sodium,DSS）诱导的结肠炎为模型,首次探讨了E.Cristatum及其胞内多糖（E.Cristatum Intracellular Polysaccharide,E.Cristatum Polysaccharide）在预防及缓解结肠炎方面的功效。基于探究E.Cristatum抵御结肠炎的功效和机制研究中,首次采用16S rRNA测序技术和肠道菌群功能预测分析E.Cristatum抵御结肠炎的作用及其机理。主要获得结论如下:（1）E.Cristatum处理可以提高结肠炎小鼠的体重及结肠长度,降低结肠炎小鼠DAI,提高IL-22并降低IL-10和TNF-a等因子的含量,减轻结肠组织炎症积累,且可以改善结肠炎小鼠结肠组织的组织病理学损伤;（2）E.Cristatum处理可以改变结肠炎小鼠肠道菌群的结构和多样性,提高Firmicutes丰度,降低Bacteroidetes丰度,在属水平上可以显著提高g-Lactobacillus的丰度;肠道菌群功能预测分析结果表明E.Cristatum处理改变的肠道菌群可以提高小鼠膜转运、代谢和机体免疫等过程,可以增强氨基酸代谢、短链脂肪酸代谢等途径的丰度,并极显著富集色氨酸代谢通路;（3）E.Cristatum处理提高结肠炎小鼠短链脂肪酸尤其是丁酸的水平,改变小鼠色氨酸代谢途径的色氨酸（Try）、吲哚-3-乙酰胺（I3AM）、吲哚-3-乙醛（IAAld）和吲哚乙酸（IAA）的含量,提高Try代谢并抑制其向I3AM代谢,进而提高IAA和IAAld的含量,从而增强肠道屏障,增强了肠道黏膜蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-1 的表达;在此基础上,本实验探讨了冠突散囊菌胞内多糖处理对结肠炎小鼠的影响,采用非靶标代谢组学分析其粪便,将代谢物结果与KEGG数据库进行联立分析,主要结论如下:（1）E.Cristatum Intracellular Polysaccharide处理可以提高结肠炎小鼠的体重及结肠长度,降低结肠炎小鼠DAI,可以提高结肠组织IL-22的含量并降低IL-10和TNF-a等因子的含量,缓解炎症积累,改善结肠炎小鼠结肠组织的组织病理学损伤;（2）E.Cristatum Intracellular Polysaccharide处理可以极显著提高DSS诱导的结肠炎小鼠短链脂肪酸水平,显著提高乙酸、丁酸及异丁酸含量;（3）E.Cristatum Intracellular Polysaccharide处理可以改变小鼠粪便代谢物,基于代谢组学分析其主要影响色氨酸代谢、戊糖和葡萄糖醛酸酯的相互转化、丙酮酸代谢、类固醇激素的合成和酪氨酸代谢,且基于LC-QQQ-MS的分析显示E.Cristatum Intracellular Polysaccharide 处理促进 Try 代谢但抑制 Try 向 I3AM 的代谢,提高将IAA和IAAld水平,增强肠道紧密连接蛋白和AhR蛋白表达;综上所述,本研究以中国特色后发酵茶茯茶中重要微生物冠突散囊菌为实验材料,通过动物实验探究其及其胞内多糖预防和缓解结肠炎的效果及机制,分别基于肠道菌群16S rRNA测序技术及非靶标代谢组学技术对其机制进行探讨,发现了冠突散囊菌可以缓解结肠炎小鼠炎症累积,而其机制可能是通过调节结肠炎小鼠肠道菌群紊乱,调节短链脂肪酸,影响色氨酸代谢来增强肠道屏障;通过LC-Q-TOF-MS和代谢组学发现其胞内多糖可以缓解结肠炎小鼠炎症累积,其机制可能是通过影响色氨酸代谢来增强肠道屏障。本实验为预防及治疗结肠炎提供了一种新的膳食方式,也为冠突散囊菌及冠突散囊菌胞内多糖分别作为益生菌及益生元用于结肠炎提供了理论依据。
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