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研究目的:观察中药黄芪提取物黄芪多糖和黄芪总皂甙对人脐静脉内皮细胞增殖和分泌内皮细胞生长因子的影响,探讨黄芪多糖和黄芪总皂甙促血管生成的潜在作用。
方法:取浓度为5-1000μg/ml的黄芪多糖和黄芪总皂甙分别作用于人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞,在24-96小时后采用MTT法测定细胞增殖活性实验(MTT法)和酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测人脐静脉内皮细胞的增殖能力和其上清液中VEGF的表达。
结果:1.浓度为5-1000μg/ml的黄芪多糖溶液加入ECV-304细胞24-72小时后,与对照组比较,MTT法检测吸光度(OD)值随浓度的增加和作用时间的延长而升高,其中100μg/ml组(P<0.05)和500μg/m组(P<0.01)与对照组比较有统计学意义。
2.浓度为5-1000μg/ml的黄芪总皂甙溶液加入ECV-304细胞24-72小时后,与对照组比较,浓度为5-100μg/ml组MTT法检测OD值随浓度增加和作用时间的延长而升高,其中10μg/ml组(P<0.05)、20μg/ml组(P<0.05)、50μg/ml组(P<0.01)和100μg/ml组(P<0.01)与对照组比较均有统计学意义;但在浓度为1000μg/ml组,OD值有下降趋势,与对照组比较无统计学意义(P>0.05)。
3.浓度为10-1000μg/ml的黄芪多糖溶液加入ECV-304细胞24-96小时后,与对照组比较,浓度为10-500μg/ml组上清液中VEGF的分泌量随药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,其中20μg/ml组(P<0.01)、100μg/ml组(P<0.01)和500μg/ml组(P<0.01)与对照组比较有统计学意义。
4.浓度为10-1000μg/ml的黄芪总皂甙溶液加入ECV-304细胞24-96小时后,与对照组比较,浓度为10-100μg/ml组上清液中VEGF的分泌量随药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,其中20μg/ml组(P<0.05)、100μg/ml组(P<0.01)和500μg/ml组(P<0.01)与对照组比较有统计学意义;但在浓度为1000μg/ml组,上清液中VEGF的分泌量减少,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.一定浓度(20-500μg/ml)的黄芪多糖对内皮细胞的增殖有促进作用,且能促使内皮细胞分泌VEGF,提示黄芪多糖可能具有潜在的促血管生成作用。
2.一定浓度(10-500μg/ml)的黄芪总皂甙对内皮细胞的增殖有促进作用,且能促使内皮细胞分泌VEGF,但高浓度黄芪总皂甙(1000μg/ml)具有抑制内皮细胞增殖和分泌VEGF的作用,提示黄芪总皂甙对血管生成可能具有双相调节作用。