论文部分内容阅读
生物制品大多是由革兰氏阴性菌表达制备的,内毒素含量通常很高,为保证生物制品使用的安全性,必须加以去除。百日咳疫苗是由百日咳杆菌表达制备的,原料液中内毒素含量极高,经过一步离子交换层析虽可去除其中95%以上的内毒素,但其残留的内毒素含量仍然很高,必须设法去除。本文将合成的多粘菌素B (PMB)亲和介质用于生物制品中内毒素的去除,探索了介质特性、溶液环境、蛋白质特性和操作条件对内毒素去除和蛋白质回收的影响规律,建立了高效的内毒素去除工艺。首先以琼脂糖凝胶为基质,PMB为亲和配基,合成了PMB QZTFF亲和介质,考察了环氧活化试剂、偶联反应pH值和偶联反应中PMB的加入量对介质合成的影响,建立了间隔臂长度可调、配基密度可控的PMB亲和介质合成方法。在此基础上,将所制备的介质用于去除不同蛋白质溶液中的内毒素,并重点考察了介质特性、溶液环境、蛋白质特性和操作条件对内毒素去除和蛋白质回收的影响。结果表明配基密度、pH值、盐浓度和蛋白质特性(等电点和疏水性)对内毒素去除效果均有重要影响。pH通过改变各分子的带电性质影响分子间的静电作用,进而影响内毒素的去除和蛋白质的回收,盐浓度的改变则会同时影响分子间的静电作用和疏水作用,而蛋白质的等电点和疏水性是影响蛋白质回收的主要因素。在优化的条件下,血红蛋白、人血清白蛋白和溶菌酶的回收率分别达到87.2%、73.4%和97.3%,相应的内毒素去除率分别达到99.8%、97.9%和99.7%。在前述实验的基础上,进行百日咳疫苗中内毒素的去除研究,重点考察介质性质(间隔臂长度、配基密度)、溶液环境(pH值、盐浓度、添加剂等)、操作条件和百日咳疫苗制备工艺的衔接方式对百日咳疫苗中内毒素去除及疫苗回收的影响,建立了合适的内毒素去除工艺。在优化的条件下,内毒素去除率可达99%以上,蛋白质回收率为50%~70%,PT回收率可达到40%~60%,FHA回收率可达到55%~75%。