球形孢子丝菌双相部分差异表达基因的RT-PCR验证

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孢子丝菌是温度依赖型的双相真菌,其可引起急性或慢性以皮肤、淋巴感染组织病变为主的孢子丝菌病(sporotrichosis)。申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)一直被认为孢子丝菌病的唯一菌种,但近期系统发育学研究表明:广义的申克孢子丝菌为一个复合体,至少由申克孢子丝菌(S.schenckii)、球形孢子丝菌(S.globosa)、巴西孢子丝菌(S.brasiliensis)、墨西哥孢子丝菌(S.mexicana)、白孢子丝菌(S.pallida)及申克孢子丝菌卢艾里变种(S.schenckii var.luriei)6个菌种组成。而我国报道的孢子丝菌病被证实由球形孢子丝菌感染引起。研究表明申克孢子丝菌复合类群的致病性与其双相性转换紧密相关。不同菌种的分布地域不同,其毒力、致病性不同导致孢子丝菌病临床类型也不相同。孢子丝菌双相转换机制复杂且申克孢子丝菌复合类群的分类地位得到澄清以后,前人研究中运用的菌株分类地位并不清楚,这些形态相似但各自具有独立遗传背景和不同地域分布的物种,其参与的双相转化的基因可能也不相同。在本课题组前期实验通过抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)成功构建中国球形孢子丝菌的双相c DNA消减文库,并对其差异表达基因进行生物信息学分析,获得部分有意义的差异表达基因的基础上。为进一步研究我国球形孢子丝菌的双向转换机制,重点选出两个高表达的差异基因进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术给予验证,以期探讨中国球形孢子丝菌的双向转化机制,为进一步寻找其致病相关基因、探讨致病性做一些研究。
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