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目的:三阴性型乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）是一种高度侵袭性疾病,以肿瘤进展快、复发转移发生率高、预后差为主要特点。在癌症发生发展过程中,microRNA（miRNA）发生失调通常会导致基因的表达异常。在前期研究发现中miR-126-3p在TNBC肿瘤细胞中的表达量显著低于其他分子分型的乳腺癌,而且已有研究表明肿瘤血管完整性可能会受到miR-126-3p的影响。因此本课题拟探究miR-126-3p在TNBC细胞中的功能以及其对TNBC血管拟态的影响,以确定其是否具有双重的抗血管生成和抗肿瘤功效,为更优的TNBC靶向治疗提供参考。方法:体外细胞培养技术培养乳腺正常上皮细胞MCF-10A以及TNBC细胞系MDA-MB-231和HCC1937;实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测miR-126-3p的表达水平;体外实验评估miR-126-3p对TNBC增殖、侵袭、迁移和血管拟态的影响,包括细胞计数试剂盒-8实验、集落形成实验、小室侵袭实验和血管生成模拟实验;利用多个在线生物信息学数据库预测并取交集miR-126-3p的靶基因,构建靶基因表达载体和其3‘-UTR点突变表达载体,通过萤光素酶活性验证靶基因;利用在线生存工具（Kaplan-Meier plotter,KM ploter）分析m RNA水平靶基因表达高低与乳腺癌患者的预后关系;收集临床样品并构建女性乳腺浸润型导管癌及其配对癌旁的组织芯片,通过免疫组化技术和免疫反应评分（immunoreactive score,IRS）标准确定每例样品靶基因蛋白水平表达情况,结合基本临床病理资料和随访数据分析靶基因与临床因素的相关性以及对患者预后的影响。结果:体外细胞实验结果:与乳腺正常上皮细胞MCF-10A相比,miR-126-3p在TNBC细胞系中表达下调;功能研究结果表明,与阴性对照组相比,miR-126-3p的过表达抑制TNBC细胞增殖（第72小时,过表达vs.阴性对照:MDA-MB-231 1.28±0.05vs.1.64±0.05;HCC1937 2.22±0.06 vs.2.63±0.03）、迁移（过表达vs.阴性对照:MDA-MB-231 32.00±1.41 vs.70.00±4.08;HCC1937 14.33±1.25 vs.34.00±1.63）、侵袭（过表达vs.阴性对照:MDA-MB-231 37.33±3.30 vs.65.67±3.30）、集落形成能力（过表达vs.阴性对照:MDA-MB-231 63.67±3.30 vs.125±3.56）和血管生成能力（过表达vs.阴性对照:MDA-MB-231 0.38±0.22 vs.1.31±0.50）,差异均具有统计学意义（P<0.05）。生物信息学分析,在TargetScan、miRDB和miRTarBase三个数据库预测并取交集,根据交集靶基因在TargetScan的累计加权得分排名,选择了排第一位的RGS3蛋白信号传导调节因子3（regulator of G-protein signaling 3,RGS3）进行进一步验证。双萤光素酶报告实验证实miR-126-3p直接结合于RGS3的3‘-UTR区以及q RT-PCR证实RGS3在TNBC细胞系中表达上调。沉默RGS3基因可抑制TNBC细胞增殖（第72小时,沉默vs.阴性对照:MDA-MB-231 1.42±0.07vs.1.74±0.05,HCC1937 1.66±0.04 vs.2.35±0.04）、迁移（沉默vs.阴性对照:MDA-MB-231 39.00±1.63 vs.71.00±4.32）、侵袭（沉默vs.阴性对照:MDA-MB-23136.33±1.24 vs.76.33±4.64）、集落形成能力（沉默vs.阴性对照:MDA-MB-23174.00±6.16 vs.131.67±2.49）和血管生成能力（沉默vs.阴性对照:MDA-MB-2310.58±0.19 vs.1.50±0.41）,差异均具有统计学意义（P<0.05）。通过导入外源性RGS3表达质粒可以逆转miR-126-3p过表达对TNBC细胞株的抑制作用。TCGA数据库分析以及KM ploter分析显示,miR-126-3p在乳腺癌患者中表现为低表达,与健康组对比,表达差异具有统计学意义（P<0.001）以及低表达乳腺癌患者25年总体生存（overall survival,OS）率明显较高表达者差,中位生存时间为173.69 vs.198.02（低表达组vs.高表达组,单位:月）,预后差异具有统计学意义（P=0.00025）。此外,KM ploter分析结果提示RGS3基因m RNA水平与TNBC患者的无复发生存（recurrence-free survival,RFS）和OS预后相关:RGS3高表达TNBC患者的RFS、OS较RGS3低表达者的RFS差,差异具有统计学意义（RFS:P=0.032,OS:P=0.0076）。免疫组织化学分析结果表明RGS3基因在乳腺癌组织中高表达（65.2%,88/135）而正常乳腺组织中低表达（22.2%,30/135）,其差异具有统计学意义（P<0.0001）;RGS3的高表达与淋巴结阳性转移（P=0.027）、雌激素受体（estrogen receptor,ER）阴性表达（P=0.028）、三阴性乳腺癌表型（P=0.016）等临床因素明显相关;RGS3阳性表达患者比RGS3阴性表达患者的10年OS更差（P=0.0455）,并在HER2过表达型和TNBC型中均表现出RGS3阳性患者具有更差预后趋。Cox单因素回归分析结果所示,RGS3阳性表达（HR 2.257;95%CI 1.176-4.333;P=0.019）、肿瘤组织学3级（HR 1.891;95%CI 1.015-3.521;P=0.045）、淋巴结阳性转移（HR 1.808;95%CI 1.033-3.194;P=0.038）和ER阴性表达（HR 1.967;95%CI 1.058-3.654;P=0.032）是乳腺癌不良预后的具有统计学意义的影响因素;cox多因素回归分析结果中,RGS3阳性表达（HR 2.216;95%CI 1.048-4.688;P=0.037）和ER阴性表达（HR 1.914;95%CI 1.008-3.634;P=0.047）是乳腺癌不良预后的具有统计学意义的影响因素。结论:miR-126-3p在TNBC中表达下调,表现为抑癌作用,其在TNBC中通过结合RGS3基因3‘-UTR区起抑制TNBC细胞增殖、侵袭和迁移等作用;miR-126-3p在TNBC中通过调控RGS3抑制血管拟态形成提示RGS3调控的信号传导途径可能参与TNBC血管拟态形成;在乳腺癌标本中miR-126-3p表现为低表达,并且低表达miR-126-3p的患者预后更差;RGS3基因的高表达与淋巴结阳性转移、ER阴性表达、三阴性乳腺癌表型等预后危险因素明显相关,提示RGS3是一个癌相关基因,并且RGS3与乳腺癌的恶性生物学行为有关;乳腺癌中RGS基因m RNA水平或蛋白水平高表达者预后更差,综合cox回归分析结果,提示RGS3是乳腺癌不良预后的独立影响因子。