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DREB转录因子识别结合基因启动子中的CRT／DRE顺式作用元件，调控与非生物逆境相关的一系列基因表达。超表达DREB的转基因植株，具有较强的耐早、耐盐和耐低温能力。 本研究根据拟南芥DREB序列与水稻基因组序列对比后，得到5个相似序列，据此设计引物，利用PCR技术，从水稻总DNA中扩增出5个编码AP2／EREBP蛋白的基因。对推测的氨基酸序列分析显示，所编码的蛋白均具备DREB转录因子的典型特征；N端有核定位信号区，C端有酸性激活区，及由58个氨基酸组成的AP2结合域中第14和19位氨基酸分别为缬氨酸(V)和谷氨酸(E)。进一步分析发现，CR350(OsDREB1-1)属于DREB1(A-1亚族)转录因子，即含本亚族特有的AP2结合域(第14至19位氨基酸为VCEVRE)、C末端有LWSY基序以及N端有保守的核定位信号区(PKRRAGRTKFKETRHP)。另外4个属于DREB4(A-4亚族)转录因子，即含本亚族特有的AP2结合域(第14至19位氨基酸为VSEIRE)，在水稻中还未见报道。上述5个基因在水稻染色体中均为单拷贝存在，且CR102(OsDREB4-1)和CR223(OsDREB4-3)位于水稻第2号染色体；CR251(OsDREB4-4)和CR350(OsDREB1-1)位于第4号染色体；CR103(OsDREB4-2)位于第10号染色体。 利用Northern和RT-PCR检测了所克隆基因的表达模式。OsDREB4-1、OsDREB4-4和OsDREB1-1为组成型表达，不受干旱(脱水)、盐(250mM NaCl)、低温(4℃)和ABA(20μM)处理诱导。OsDREB4-2和OsDREB4-3受干旱和盐诱导表达，但均不受低温和ABA诱导。组织表达特异性检测表明，OsDREB4-1在茎和穗中的转录水平很高，在叶中较低，在根和叶鞘中几乎检测不到转录本；OsDREB4-2在茎和叶中表达较高，在根和穗中有微弱表达，在叶鞘中未检测到其表达：OsDREB4-3在根、茎和穗中表达，在叶中的表达微弱，在叶鞘中不表达；OsDREB4-4在各组织中的转录水平较均一；OsDREB1-1在叶、叶鞘和穗中的表达量相当高，在茎中的表达量略低，在根中的表达微弱。中国农业大学博上学位论文摘要 对DREBI型转录因子(A一1亚族)’万DRE元件识别结合的特异性已有J一泛研究。但DREB4型转录因一子(A一4亚族)与DRE元件识别结合的特异性还未见报道。本文选择osDREB4一2和osDREB4一3作为典型的DREB4型转录因子，利用酵母单杂交方法，对它们识别结合DRE元件的特异性进行了研究。结果表明，OsDREB4一2和osDREB4一3均能特异识别结合DRE元件，激活下游报道基因万巧了和LacZ表达。因此，osDREB4一2和osDREB4一3可能作为DREB4型转录因子，参与对干旱和高盐的分子应答反应。 为了深入了解所克隆的水稻DREB转录因子的生理功能及与非生物逆境应答的关系，构建了乙七刃吸五万4一2的植物表达载体并转化了拟南芥，筛选到了转基因植株。转基因植株纯系的筛选和耐逆性鉴定正在进行中。