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猪繁殖与呼吸综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病为特征的高度接触性传染病。自该病爆发以来,严重危害着养猪业的发展,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗接种作为PRRS防控的主要手段得到广泛的应用,虽然PRRS疫苗能够保护猪只抵抗同源PRRSV的攻击,但是其免疫保护机理尚未十分清楚。本研究通过对PRRS疫苗免疫后同源病毒感染急性感染期体内T细胞亚群和相关细胞因子的变化情况进行检测,从而对PRRS疫苗免疫保护机理进行研究和阐述。(一)PRRSV感染与同源免疫再感染后T细胞亚群分化差异的研究选取21头PRRSV抗原抗体均为阴性的30日龄健康仔猪,以每组7头仔猪随机分为三组。免疫组以105 TCID50/头的剂量免疫PRRS疫苗株HuN4-F1 12,攻毒组接种培养基DMEM;在第35d,以105 TCID50/头相同剂量的HP-PRRSV HuN4毒株对上述2组猪只分别进行攻毒;空白对照组猪只接种DMEM不进行攻毒。在攻毒后急性感染期内第3～21d分析PRRSV感染与同源免疫再感染后PBMC中T细胞亚群表型的变化情况。应用流式细胞分析技术对PBMC中的CD3+、CD4+、CD8+以及CD25+Foxp3+T细胞亚群分别进行检测。结果显示,HuN4毒株感染后,相比对照组猪只,攻毒组猪只中CD3+T细胞数量在整个感染期明显降低,CD4+CD8-T细胞在感染后第7和10 d显著降低,CD8+CD4-T细胞数量感染后第7d降低而在14d后明显升高,CD25+Foxp3-T细胞数量在第3d和7d显著降低,CD25+Foxp3+T细胞数量仅在第7d升高。与此相反,免疫组猪只T细胞亚群数量均维持相对稳定。(二)PRRSV感染与同源免疫再感染对细胞因子变化的影响利用商品化试剂盒对攻毒后猪只体内与CD4+T细胞分化相关的Th1、Th2、Th17以及Treg指征性因子的变化情况进行检测,结果显示:攻毒后第3天,攻毒组猪只血清中IL-10水平较高,攻毒后第7天免疫组猪只血清中TGF-β水平普遍高于攻毒组和对照组猪只,差异显著。攻毒后3-14天,攻毒组猪只血清中IFN-γ水平显著高于免疫组猪只。攻毒后第10天,攻毒组IL-12水平显著高于免疫组。利用相对荧光定量对免疫及攻毒后猪只体内各类细胞因子的mRNA水平进行检测,结果显示:免疫后,空白组对照组猪只相比,免疫组猪只外周血中各类细胞因子维持稳定。攻毒后,攻毒组猪只体内IL-12和IL-2转录水平下调,IL-4、IL-13、IL-5、STAT6、PD-L1、IL-10、CD86、CD80和TGF-β转录水平上调。攻毒后第3天攻毒组猪只IL-17转录水平低于免疫组猪只,攻毒后第7天攻毒组猪只体内IFN-γ转录水平下调,TNF-α转录水平在攻毒后第3-7天上调。(三)疫苗株与野毒株对骨髓源树突状细胞(Bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)感染能力的分析从15日龄仔猪的骨髓中分离单核细胞,以GM-CSF和IL-4连续刺激7d后,检测DC细胞特征性标记分子CD152,然后对阳性细胞分别以HuN4-F1 12疫苗株和野毒株HuN4进行孵育,通过流式细胞技术、间接免疫荧光及荧光定量等方法分析PRRSV感染DC能力。结果显示,通过诱导可获得63%CD152阳性的DC细胞,PRRSV疫苗株HuN4-F1 12感染DC细胞能力显著强于强毒株HuN4株病毒。综上所述,PRRSV感染后急性感染期内,疫苗免疫能够维持CD8+T细胞和CD4+T细胞的相对稳定,调控CD4+T细胞中Th1类细胞因子的生成,促进机体免疫应答,从而为机体提供免疫保护。此外,本研究又对疫苗株与野毒株感染DC细胞的能力进行了分析。研究结果为进一步研究PRRSV疫苗同源免疫保护机制提供了基础。