天花粉蛋白对宫颈癌CaSki细胞生长的抑制作用研究及机制探讨

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目的:  以宫颈癌CaSki细胞作为实验对象,分析天花粉蛋白(TCS)对宫颈癌细胞增殖、细胞自噬和凋亡的影响,由此进一步阐明TCS治疗宫颈癌的分子基础。  方法:  (1)MTT方法分析TCS对CaSki细胞生长增殖的抑制作用和有效药物作用浓度;  (2)光学显微镜观察TCS对细胞形态的影响;  (3)Western blot检测细胞内自噬相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平;  (4)激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3融合蛋白在CaSki中的亚细胞分布;  (5)流式细胞术检测TCS处理对CaSki细胞凋亡和细胞周期的影响;  (6)透射电镜观察TCS对CaSki细胞内凋亡小体和自噬小体形成的影响。  结果:  (1)TCS可有效抑制CaSki细胞的生长增殖,48 h处理组TCS的IC50为178.5μg/mL;  (2)与对照CaSki细胞相比,TCS处理后的细胞形态由规则的长梭形转变为肿胀、贴壁差、不规则的多角形或圆形,且脱落细胞增加;  (3)TCS能减少CaSki细胞自噬蛋白Beclin1、LC3A/B的表达,但增加自噬底物蛋白P62的积累;  (4)与对照CaSki细胞相比,TCS处理后的CaSki细胞中斑点状绿色荧光信号(有GFP-LC3融合蛋白结合的自噬小体)形成减少;  (5)TCS能诱导CaSki细胞凋亡,使细胞凋亡率增加,下调抗凋亡蛋白Bcl2和凋亡底物蛋白PARP的水平,但增加促凋亡蛋白Bax的表达;  (6)TCS能干扰CaSki细胞周期,导致S和G2/M期细胞比例增加;  (7)电镜观察发现,相较于对照组细胞,TCS处理后的细胞凋亡明显,细胞内凋亡小体形成增加,但自噬小体的形成明显受到抑制。  结论:  TCS能有效抑制宫颈癌CaSki细胞生长与增殖,其作用机制可能与其干扰细胞周期、诱导细胞凋亡和抑制细胞自噬密切相关。
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