红江橙嵌合体及其衍生材料的遗传背景分析

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红江橙(CitrussinensisOsbeckcv.Hongjiangcheng)是广东省著名的优良甜橙品种,具有早结、丰产、质优等优点,曾是闽南和湛江地区的主栽品种。由于红江橙为嫁接嵌合体,其无性繁殖后代的果实性状会出现分离(可分离为橙型红肉果、红黄肉嵌合果、橙型黄肉果、橘橙嵌合果、橘变果)。研究红江橙嵌合体的遗传背景和分离规律,是进一步弄清其嵌合机理,为植物的人工嫁接产生嵌合体,进而创造果树嵌合体育种方法的重要基础。 本研究通过体胚培养获得红江橙单细胞起源的植株,并利用SSR、ISSR、RAPD分子标记对红江橙3种分离类型及其实生植株、体胚植株的遗传背景进行了分析,探讨了各类型红江橙的遗传组成及嵌合情况,获得的主要研究结果有: 1.以不同类型的红江橙(橙型红肉果、橙型黄肉果、橘变果)果实的枝条上叶片基因组DNA为模板,从22对SSR引物中筛选出7对多态性引物,从5个ISSR引物中筛选出3个多态性引物,从9个RAPD引物中筛选出2个多态性引物,用于实生后代及红江橙体胚培养的幼苗的遗传分析。 2.用多态性SSR引物对橙型红肉果、橙型黄肉果、嵌合橘变果、橘变果的实生群体进行遗传分析,发现各类型实生后代的电泳图谱相同,并且与橙型黄肉果的电泳图谱一致。多态性RAPD引物和ISSR引物也能得到相同或相似的试验结果,表明各分离类型的实生后代均为橙。 3.分别以红江橙成熟果实的饱满种子、败育胚、花后4~8周的幼嫩胚珠为外植体,进行了体细胞植株诱导的研究。研究发现各种外植体均能诱导出植株,但发育途径不同。花后4~8周的幼嫩胚珠诱导周期最短,大多直接发育成胚状体,再转化成植株。败育胚则在接种后40天左右长出大量胚性愈伤,培养2~3个月左右长出大量胚状体,继而转化成植株。饱满种子诱导周期过长,获得的体细胞植株数量极少。幼嫩胚珠含合子胚可能性比败育胚大。因此,从试验周期及试验目的看,败育胚为最佳外植体。 4.将体胚途径产生的红江橙幼苗基因组DNA与3种分离果的红江橙枝条上的叶片基因组DNA、4种分离果的实生苗后代的基因组DNA一起进行SSR、ISSR、RAPD标记分析,结果表明,除橘变果的体细胞植株外,其余体细胞植株的电泳图谱均与黄肉果及实生苗的电泳图谱相同或相近,主要扩增条带相同;橘变果体细胞植株的扩增图谱在特定位点缺少一条扩增片段。结果表明,橘变果的体细胞植株已完全与橙型类型植株在遗传上分离,而橙型果的体细胞植株保持着与橙相同的遗传背景。 5.总结实生群体与组培诱导苗的遗传鉴定结果,发现各类型红江橙实生后代电泳图谱相同;且与黄肉橙电泳图谱相同;红肉橙、橘变果电泳图谱相同,不同之处在于条带颜色深浅差异;体胚植株中存在橘及橙纯合型植株。因此认为本研究所取橘变果材料仍为嵌合体状态,与红肉橙相似,为橘、橙相掺杂的嵌合体,而其表现性状差异很大,可能是橙成分在橘变果实中含量较少或是橘成分在橘变果中含量较多所致。此外,结合实生苗及体胚植株的遗传背景分析结果和它们的来源,对红江橙LI、LII、LIII层的嵌合状态进行了分析。
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