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研究背景和目的:乳腺癌（Breast Cancer,BC）是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率位居女性恶性肿瘤之首,严重威胁着全世界妇女的健康。近年来我国乳腺癌的发病率也呈逐年上升趋势,带来很大的社会及经济负担。尽管目前外科手术方式、化疗、内分泌治疗、靶向治疗及免疫治疗等多种治疗手段不断更新,但乳腺癌患者的死亡率仍然居高不下。20%~30%的乳腺癌患者在确诊时和原发肿瘤治疗后会发生转移,约90%的癌症相关死亡归因于转移,存在远处转移的乳腺癌患者5年总生存率仅为25%。因此,积极探索乳腺癌的发病及肿瘤转移机制尤为重要。INHBA（抑制素亚基βA）是转化生长因子β超家族的成员,不仅在人类早期胚胎发育及组织终末分化等生物学过程中发挥重要作用,而且参与了恶性肿瘤的发生、发展并与临床预后密切相关。然而,INHBA在乳腺癌中的功能和潜在机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号转导通路是一条在生物进化中极为保守的通路,与癌症生物学的多个方面有很大的相关性,包括肿瘤细胞增殖、迁移、肿瘤干细胞特性维持、血管生成和肿瘤免疫等。研究发现Wnt受体在乳腺癌细胞中表达升高,尤其是在化生性乳腺癌和三阴性乳腺癌。INHBA与Wnt/β-catenin信号通路之间有无关联?INHBA能否通过Wnt/β-catenin信号通路来参与肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,目前尚不清楚。因此,探索INHBA在乳腺癌中的作用及相关机制研究具有重要的科学意义。通过本文的研究,阐明INHBA促进乳腺癌增殖、迁移及侵袭的功能和相关分子机制,有望为乳腺癌的发生和发展机制提供新的理论依据,也为乳腺癌的治疗和诊断提供了有效的潜在靶点。第1部分INHBA促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化（EMT）目的:探讨INHBA在乳腺癌进展中的生物学功能及是否促进了乳腺癌细胞EMT的发生。方法:（1）应用qRT-PCR及Western Blot法对比四种乳腺癌细胞系（MDA-MB-468、SUM149PT、MCF-7、SKBR3）和人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A中INHBA m RNA和蛋白的表达水平。（2）采用免疫组化的方法检测141例浸润性乳腺癌石蜡标本中INHBA和EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin）表达情况,分析INHBA蛋白高表达与临床病理特征之间的关系,同时分析INHBA、E-cadherin和N-cadherin三者之间的相关性。（3）利用慢病毒载体干扰乳腺癌细胞系MCF-7中的INHBA的表达,通过qRT-PCR和Western Blot实验确定过表达和干扰效率。（4）通过CCK-8和Ed U实验检测敲低INHBA后对乳腺癌细胞增殖能力和乳腺癌细胞活性的影响。（5）通过Transwell实验检测INHBA对MCF-7细胞迁移和侵袭特性的影响。（6）采用Western Blot实验检测干扰MCF-7细胞中的INHBA的表达后EMT表型变化（E-cadherin和N-cadherin表达情况）。结果:（1）实验结果与通过GEPIA数据库检索结果一致:与人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A细胞相比,四种乳腺癌细胞系（MDA-MB-468、SUM149PT、MCF-7、SKBR3）中INHBAm RNA和蛋白水平均显著升高,其中MCF-7细胞系表达水平最高。（2）相比于良性增生乳腺组织,乳腺癌组织中INHBA蛋白有较高表达率,二者差异具有统计学意义（χ2=12.283,P＜0.05）。INHBA高表达与组织学分级（χ2=6.191,P＜0.05）、淋巴结转移（χ2=14.223,P＜0.05）及TNM分期（χ2=6.038,P＜0.05）显著相关。与年龄（χ2=0.191,P＞0.05）、肿瘤直径（χ2=1.049,P＞0.05）及分子分型（χ2=4.666,P＞0.05）均无显著相关性。（3）同时乳腺癌组织中INHBA高表达与E-cadherin、N-cadherin三者之间存在相关性,INHBA高表达与E-cadherin呈负相关（r=-0.249,P＜0.05）,即INHBA高表达者E-cadherin表达下降;而INHBA高表达与N-cadherin表达呈正相关（r=0.442,P＜0.05）,即INHBA高表达者N-cadherin表达增强;E-cadherin表达与N-cadherin表达呈负相关（r=-0.536,P＜0.05）,E-cadherin低表达者N-cadherin阳性表达率升高。（4）CCK-8和Ed U的实验结果表明,敲低INHBA导致MCF-7细胞增殖率降低。反之,过表达INHBA促进MCF-7细胞的增殖（P＜0.01）。（5）Transwell的实验结果表明,干扰INHBA抑制MCF-7细胞迁移和侵袭,而过表达INHBA促进MCF-7细胞的迁移和侵袭（P＜0.05）。（6）在MCF7细胞中干扰INHBA后,E-cadherin的表达水平增加,而N-cadherin的表达水平降低;相反,过表达INHBA组E-cadherin蛋白表达水平低于对照组,N-cadherin蛋白表达水平高于对照组（P＜0.05）。结论:（1）INHBA在乳腺癌组织和细胞中表达水平明显高于良性增生乳腺组织和正常乳腺细胞,且INHBA高表达与乳腺癌患者的TNM分期晚、存在淋巴结转移以及肿瘤分化差密切相关。（2）INHBA促进了乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。（3）INHBA促进了乳腺癌细胞EMT的发生。第2部分INHBA通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭目的:研究乳腺癌中INHBA表达对Wnt/β-catenin信号通路中核心成员m RNA和蛋白表达水平表达的影响,探索INHBA促进乳腺癌发生发展的潜在机制。方法:（1）利用慢病毒载体干扰乳腺癌细胞系MCF-7中的INHBA的表达,并用XAV-939（Wnt/β-catenin信号抑制剂）处理转染后的细胞,共设置四个组:空白对照组、pc-INHBA组、空白+XAV-939组、pc-INHBA+XAV-939组。通过qRT-PCR和Western Blot实验检测被XAV-939处理后对Wnt/β-catenin通路中核心成员m RNA和蛋白质水平的影响。（2）通过MTT实验检测被XAV-939处理后对乳腺癌细胞增殖能力的影响;通过Transwell实验测定被XAV-939处理后对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。（3）设计裸鼠成瘤实验检测敲低INHBA基因后对乳腺癌细胞增殖能力的影响;提取瘤体蛋白,采用Western Blot检测敲低INHBA基因后对乳腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路核心成员蛋白表达水平的影响。结果:（1）转染了pc-INHBA质粒组的MCF-7细胞,其Wnt/β-catenin通路中的核心成员β-catenin和GSK-3β的m RNA的水平明显升高,且β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β明显升高。应用信号抑制剂XAV-939处理转染pc-INHBA质粒的MCF-7细胞,发现由INHBA过表达引起的β-catenin和GSK-3βm RNA水平升高的效应得到逆转,且β-catenin、p-GSK-3β的蛋白表达水平及p-GSK-3β/GSK-3β明显降低（P＜0.01）。（2）INHBA过表达后MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增强,应用信号抑制剂XAV-939阻断Wnt/β-catenin通路后,INHBA促进MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的效应得到逆转（p＜0.05）。（3）与NC组相比,sh RNA-INHBA组裸鼠成瘤瘤体体积、重量明显减少,且β-catenin和p-GSK-3β蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:（1）INHBA能够激活Wnt/β-catenin通路,提高Wnt/β-catenin通路核心成员β-catenin和GSK-3βm RNA表达水平及GSK-3β蛋白的磷酸化水平。（2）INHBA通过激活Wnt/β-catenin通路,促进了乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。