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卷丹(Lilium lancifolium)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)中具有极高观赏价值的野生资源,我国卷丹资源总量稀少,目前已被列为华东地区珍稀濒危物种。为长期有效地保存该野生种质,本课题组建立了卷丹茎尖玻璃化法超低温保存技术,并获得茎尖液氮保存后存活率74.9%,该数值是以多代试管苗为试材的平均值。为提高卷丹茎尖玻璃化法超低温保存后存活率,本文以不同继代试管苗为研究对象,探索茎尖继代培养对玻璃化法超低温保存效果的影响,以期寻找卷丹超低温保存最适宜的继代苗；同时从解剖学观察和蛋白质表达两方面进一步探究其原因,为茎尖超低温保存提供依据。研究结果如下：(1)茎尖继代次数对其液氮保存后的存活有显著影响。卷丹1-4代试管苗茎尖玻璃化法超低温保存后存活率分别为55.8%、93.3%、67.0%和64.1%,即第2代试管苗茎尖液氮保存后存活率显著高于其他继代次数茎尖。(2)茎尖同代培养不同天数也显著影响其液氮保存后的存活。卷丹第2代试管苗培养20d、40d和60d的茎尖玻璃化法超低温保存后存活率分别为50.0%、45.0%和88.0%,即第2代试管苗培养60d的茎尖液氮保存后存活率显著高于其他培养天数茎尖。(3)采用不同玻璃化法超低温保存卷丹2代试管苗,结果表明常规玻璃化法、包埋玻璃化法和滴冻玻璃化法超低温保存后茎尖存活率分别为88.0%、31.8%和90.6%,即常规玻璃化法和滴冻玻璃化法超低温保存后的茎尖存活率极显著高于包埋玻璃化法。(4)液氮保存后存活率高的2代试管苗茎尖顶端分生组织解剖学观察显示,其细胞特征为细胞体积小、细胞核大、细胞质浓密且无明显液泡,这种区别于其他继代次数茎尖的细胞特征与2代试管苗茎尖超低温保存效果显著高于其他3代密切相关。(5)卷丹2代和4代试管苗的蛋白质双向电泳研究显示,两者总可溶性蛋白质表达存在差异,共获得40个差异表达蛋白点。其中随着继代次数的增加,4代试管苗内有16个上调表达蛋白点,24个下调表达蛋白点,这些差异表达蛋白与其对超低温保存效果的作用有待进一步研究。综上所述,卷丹继代培养60d的第2代试管苗是玻璃化法超低温保存最适宜的继代苗,采用常规玻璃化法和滴冻玻璃化法进行超低温保存时可获得较高的存活率,以此达到完善卷丹茎尖超低温保存技术的目的。