血府逐瘀方物质基础及提取纯化工艺研究

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中药复方是我国医药宝库的重要组成部分,是中药运用的主流。复方的功效是合理配伍产生的,而不是方中各味药材的简单加和。因此,在复方研究中,体现复方整体性,是中医药理论指导中药研究的具体表现。单味药材研究为复方研究积累了丰富资料,但却无法代替复方研究。这种研究方式虽然简化了问题,复方的潜能却得不到体现。本研究以血府逐瘀方为实验对象,把复方作为一个有机整体,对复方复杂物质体系的分离分析及含量测定方法、复方有效部位筛选及配伍、有效组分的确认等难点问题进行研究,对大孔吸附树脂在复方有效组分的分离及富集纯化中的应用也进行了系统研究。 1 物质基础研究 全方整方提取,选择D101大孔吸附树脂为分离载体,在定性鉴别反应和指纹图谱指导下进行切割和流份合并,实现全方合理分离。建立了分离部位中主要类别组分(多糖、总黄酮等)、主要单体指标成分(柚皮甙、芍药苷、阿魏酸等)的含量分析方法。建立动物模型,开展药效试验,筛选出该方降血脂作用的两个药效活性部位(PF、FP),并发现它们具有配伍增效作用。采用部位与全方各药材成分溯源分析方法,基本明确了PF、FP两部位中的组分类型及其归属,即PF部位中含组分1,主要来自方中活血药组,FP部位含组分2,主要来自理气药组,达到了筛选复方有效部位并阐明其化学组成的目的,为进一步研究奠定了基础。同时研究了该方不同配伍组合对药效指标成分溶出量的影响,表明全方合煎使得芍药苷的溶出量升高,但阿魏酸的溶出量降低。 2 提取纯化工艺研究 提取工艺研究: 以L16(45)正交实验设计进行目标组分的提取工艺研究,考察了提取溶剂、提浙江大学硕士学位论文取时间、提取温度、提取次数对组分提取率的影响。结果组分l最佳提取工艺条件为:以40%乙醇为提取溶剂、80℃水浴回流提取3次、每次l.sh;组分2最佳的提取工艺为:以40%乙醇为提取溶剂、80℃水浴回流提取4次、每次1.5h。 纯化工艺研究 研究了D101树脂对目标组分的吸附性能及浓度、PH值、温度、流速、洗脱剂种类等因素对树脂吸附性能的影响,得到树脂对目标组分最佳吸附条件。组分1:样品液浓度0.4mg/ml,pH 6.0,吸附流速ZBV/h,12倍树脂床体积40%乙醇可以完全解吸;组分2:样品液浓度0.smg/ml,PH 3.0,吸附流速IBV/h,15倍树脂床体积的70%乙醇可以完全解吸。 以LI。(4s)正交实验设计研究了目标组分在D101树脂上的纯化工艺条件,考察了除杂纯化溶剂浓度及其用量、解吸溶剂浓度及其用量对目标组分含量和回收率的影响。组分1最佳纯化工艺条件为:上样量为树脂最大吸附量的60%,6倍树脂床体积的20%乙醇为除杂纯化溶剂,流速2 BV/h,3倍树脂床体积的40%乙醇为解吸溶剂,所得组分含量为46士3.42%,回收率为87.6士5.45%(下3);组分2:上样量为树脂最大吸附量的60%,8倍树脂床体积的20%乙醇为除杂纯化溶剂,流速为1 BV/h,3倍树脂床体积的70%乙醇为解吸溶剂,所得组分含量为55士1.25%,回收率为48.1士5.11%(n二3)。
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