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目的探究转录因子ATF3参与调控8-Br-cAMP联合MPA诱导人子宫内膜间质细胞蜕膜化泌乳素分泌的分子机制。方法通过免疫组化方法明确ATF3在子宫内膜中表达及定位。采用Western blotting实验调查胚胎反复种植失败女性与胚胎一次移植成功女性分泌期子宫内膜ATF3的表达情况。利用Western blotting、Q-PCR对应检测8-Br-cAMP联合MPA诱导子宫内膜间质细胞体外蜕膜化后ATF3与miR-135b表达变化。以Q-PCR、ELFA方法调查AIF3和miR-135b对间质细胞蜕膜化泌乳素(decidual prolactin,dPRL)表达、分泌的调控作用;细胞免疫荧光实验分析二者对间质细胞形态的影响。采用染色质免疫共沉淀、Q-PCR实验探究ATF3对miR-135b的调控作用。运用 Westernblotting、Q-PCR 实验验证 ATF3 及 miR-135b 对 FOXO1蛋白及mRNA的调控作用。结果ATF3表达于人子宫内膜间质细胞及上皮细胞。胚胎反复种植失败患者(n=31)分泌期子宫内膜组织中ATF3表达较胚胎一次移植成功女性(n=29)显著降低(P<0.001)。8-Br-cAMP联合MPA诱导间质细胞ATF3 mRNA早期表达增多,于lh升高5倍;ATF3蛋白表达也相应增高,于16 h增加4倍以上。无外源激素存在时,腺病毒介导ATF3的过表达以浓度依赖方式显著增加人子宫内膜间质细胞蜕膜化标志分子dPRL的表达与分泌(P<0.01),同时促进间质细胞骨架蜕膜化样改变;功能缺失实验进一步验证沉默内源性ATF3表达可抑制8-Br-cAMP联合MPA诱导下蜕膜化间质细胞分泌的dPRL至60%(P<0.01),并使细胞呈去蜕膜样变。miR-135b在间质细胞蜕膜化过程中表达显著降低,16 h减少至30%(P<0.001)。MiR-135b与FOXO1 3’UTR区种子序列结合,过表达miR-135b使hESCs中FOXO1蛋白表达减少至30%,并显著抑制蜕膜化间质细胞dPRL分泌(P<0.01)。ATF3结合miR-135b启动子区,抑制miR-135b转录(P<0.001),上调FOXO1蛋白表达,修复miR-135b导致的蜕膜细胞dPRL分泌减少,促进细胞蜕膜化进程。结论人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中,ATF3表达明显升高而miR-135b表达显著降低。miR-135b下调FOXO1表达,过表达ATF3转录抑制miR-135b,促进FOXO1表达,参与调控8-Br-cAMP联合MPA诱导人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中dPRL的表达。ATF3调控子宫内膜蜕膜化过程机制的研究,有望为提高胚胎种植率和妊娠成功率提供新的分子靶点和治疗方向。