论文部分内容阅读
研究背景与目的：食管癌是来源于食管粘膜上皮的肿瘤,包括鳞状细胞癌和腺癌,在亚洲以食管鳞癌为主,我国是食管癌的高发区,尤以河南林县为重。食管癌的发病率在所有肿瘤中为第8位,死亡率在所有肿瘤中为第6位,90%的患者确诊时已为Ⅲ期或Ⅳ期。放疗、化疗仍为晚期食管癌患者的主要治疗手段,但晚期食管癌患者对化疗的反应率仅20～40%,中位生存期为8～10个月,如何提高食管癌患者对放化疗的敏感性仍然是一个研究热点。分子靶向治疗是近年研究的热点,其中靶向于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)通路的药物研究最为深入。EGFR是表皮生长因子受体,在许多肿瘤细胞中表达,而食管癌组织多可检测到EGFR的过表达,其中以食管鳞癌多见。针对EGFR的靶向药物包括酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)和抗EGFR抗体。尼妥珠单抗是人源化EGFR局粘附性单克隆抗体,能够特异性识别EGFR胞外Ⅲ区结构域,阻断EGFR下游信号通路,具有选择性强、人源化程度高、半衰期长、毒副反应较小等特点。体内外试验证实尼妥珠单抗具有促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抗肿瘤血管生成等作用。尼妥珠单抗能够提高头颈部恶性肿瘤的放、化疗敏感性,我国已批准尼妥珠单抗用于头颈部恶性肿瘤的治疗。目前尼妥珠单抗在头颈部恶性肿瘤中的研究相对较多,而在食管癌中的研究较少,本实验研究尼妥珠单抗对食管鳞癌Eca109、TE-1细胞化、放疗敏感性的影响,并初步探讨其可能的机制。方法：1.流式细胞仪检测食管鳞癌Eca109、TE-1细胞EGFR表达的平均荧光强度,免疫组化法检测TE-1、Eca109细胞EGFR的表达水平。2.MTT法检测尼妥珠单抗、紫杉醇、顺铂、5-Fu单药以及尼妥珠单抗分别联合紫杉醇、顺铂、5-Fu对Eca109、TE-1增殖的影响。3.细胞克隆形成实验检测尼妥珠单抗对Eca109、TE-1细胞放疗敏感性的影响。4.流式细胞仪分析尼妥珠单抗对Eca109、TE-1细胞周期分布的影响。5.流式细胞仪分析尼妥珠单抗分别与紫杉醇、顺铂、5-Fu联合对Eca109、TE-1细胞凋亡的影响。6.透射电镜观察尼妥珠单抗对食管癌Eca109、TE-1细胞自噬的影响。7. RT-PCR、Western blotting方法检测尼妥珠单抗对Eca109、TE-1细胞becline-1mRNA及蛋白水平的影响。结果：1.Eca109细胞EGFR表达平均荧光强度(MFI)为66.08,TE-1细胞平均荧光强度为123.17,免疫组化Eca109细胞EGFR表达为+++,TE-1细胞+。2.尼妥珠单抗增强紫杉醇、顺铂对Eca109细胞的杀伤效应,但不能增强紫杉醇、顺铂对TE-1细胞的杀伤效应,尼妥珠单抗未增强5-Fu对Eca109、TE-1细胞的杀伤效应。3.尼妥珠单抗增强Eca109细胞的放疗敏感性,但对TE-1细胞的放疗敏感性无明显影响。4.尼妥珠单抗明显增强紫杉醇、顺铂诱导的Eca109细胞凋亡,但未增强5-Fu诱导的Eca109细胞凋亡;而在TE-1细胞中,尼妥珠单抗对三种化疗药物诱导的凋亡无明显增强作用。5.尼妥珠单抗诱导Eca109细胞G0/G1期细胞周期阻滞,S期细胞减少；但对TE-1细胞的周期分布无明显影响。6.尼妥珠单抗诱导Eca109细胞自噬增强,对TE-1细胞自噬无明显影响。7.尼妥珠单抗诱导Eca109细胞Becline-1mRNA和蛋白水平表达上调,对TE-1细胞Becline-1的表达无影响。结论：1.尼妥珠单抗增强EGFR高表达的食管鳞癌Eca109细胞的化、放疗敏感性,而对EGFR低表达的食管鳞癌TE-1细胞的化、放疗敏感性无明显影响。2.尼妥珠单抗增强食管鳞癌Eca109细胞的化、放疗敏感性的机制可能与诱导细胞凋亡增加、细胞周期G0/G1期阻滞、自噬增强等机制有关。