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目的:自身抗体高表达为自身免疫性疾病的重要特征,其具体机理尚未揭示清楚。Whitehouse于1972年首先报道肿瘤患者体内存在抗平滑肌抗体。多年来,国内外陆续报道了肿瘤患者体内存在抗细胞质或(和)细胞核成分的自身抗体,同时发现各类肿瘤患者体内可存在多种自身抗体。但长期以来,对肿瘤患者体内是否存在高表达现象仍存在争论。一定比例正常人存在生理性自身抗体,且随年龄增长阳性率增加,这于肿瘤发病率随年龄增长而增加相似。因此,对肿瘤患者的自身抗体是否具有肿瘤相关性,或只是反映肿瘤的高龄发病性也存在着争论。但许多学者的研究却倾向于自身抗体具有肿瘤相关性。Imai研究认为:肿瘤患者产生的抗核抗体与目前已知自身免疫性疾病患者体内的自身抗体谱不同。国内夏晴用蛋白印迹法对肺癌自身抗体的研究中发现:肺癌组抗体谱较正常人宽,表明肺癌患者自身免疫反应不同于正常人生理性免疫反应。 近年来,细胞因子白细胞介素6(IL-6)被发现在肿瘤中存在高表达,与抗体的抗肿瘤免疫有关。同时临床研究认为IL-6水平与肿瘤临床分期有关,分期越晚,肿瘤负荷越大,IL-6水平越高;有远处转移的晚期患者血清IL-6水平明显高于无转移者;治疗有效者血清IL-6水平会有一定程度的下降,治疗无效者血清IL-6水平会有进一步 中文摘要的升高。肿瘤中几6水平是否与自身抗体伴随增高?二者之间的关系如何?目前尚未见文献报道。本实验通过检测胃癌患者外周血中的IL十及自身抗体(类风湿因子RF」和抗核抗体kd)水平以探讨二者之间存在的关系,以期发现自身抗体在肿瘤中增高的机理。 方法: 1 病例选择: 选择2000年8万刁001年8月住院的胃癌患者共 53例(均经手术和病理证实人其中男性33例,女性20例,年龄39刁3岁,平均59岁。所有患者均未进行任何放疗。化疗等治疗措施。 同时选择四例健康人设为对照组,二者在年龄、性别方面无显著差异性。实验组及对照组均无任何自体兔疫性疾病,亦未接触免疫抑制性药物。 2 血清采集: 实验组于手术前一天及术后第七天各采外周静脉血1次:对照组采外周静脉血一次。其中3ml静脉血取血清做工gA、IgG、IgM、ANA、RF检狈。另取3ml 静脉血离心,取上清《0 C低温保存,统一检测几6。 3ANA的检测: 采用问接免疫荧光实验法。仪器与试剂:OLYMPUS荧光显微镜(日本人 鼠肝底物切片(协和医院)抗人 IgG荧光抗体。步骤:鼠肝冰冻切片取出立即吹干,滴加标本于切片孔内,放湿盒内 *7℃)温育 30min,切片用0.01mol/1(PH:7.2)PBS缓冲液泡洗 3次(5。in/次),抗人 IgG荧光抗体配制的染液染色。再温育、清洗,缓冲甘 2 中文摘要 油封片。荧光显微镜镜检,出现黄绿色荧光为阳性判定标 准。 4RF、IgG、IgM及IgAo冽定: 采用速率散射比 浊法,Beckman(美国)Array-360 system常规检狈。 5 IL-6测定: 采用双抗体夹心 ILI SA法。试剂盒购自晶美公司。 5.1燥作步骤:从己平衡至室温的密封袋中取出所 需板条,其他板条密封放回4℃;除空白孔外,分别将标 本或不同浓度标准品 门00 v 1/孔)加入相应孔中,用封 板胶纸封住反应孔,室温 (2f5C)孵育 120分钟;洗 板 4次;除空白于外,加入检坝剂工作液(100 yi/孔)。 封住板孔,室温门0-* ℃)孵育“ 分钟:洗板4久 力 入底物A(sa),B(sb)(各 1滴或50 11 1/孔)。避光室温 10-30 分钟;加入终止液门滴或 50p/孔人 混均后即可测量 0D450值(5分钟 内)。 5.2结果判断:每个标准品和标本的OD值应减去 零孔的OD值;手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐 标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。 通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度:若标本n 值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应 乘以稀释倍数。 6患者临床资料统计: 术中统计肿瘤直径;根据国际抗癌联盟 (198)公布 的PTNM分期标准进行TNM分期;术后常规进行病理检查, 统计组织类型。 3 中文摘要 7统计学处理: 采用spss10.0软件进行数据处理。自身抗体ONA,RF)阳性率的比较采用X’检验:实验组术前,术后及对照组IL卡水平的比较采用上检验;自身抗体与多种因素的相关性分祈采用LOgistiC回归分析。 结 果: 二实验组病人手术前、手术后及对照组自身抗体阳性率比较:由表1可见,实验组手术前ANA,RF阳性率分别