第一部分伤寒杆菌质粒pR<,st98>毒力基因spv的研究目的:证实伤寒杆菌耐药质粒pR<,st98>是否含有其他沙门菌质粒毒力基因spv的同源序列,并分析pR<,st98>毒力基因与鼠伤寒沙门菌质粒毒力基因的同源性,为阐明耐药伤寒杆菌致病机制提供依据.方法:从Genebank中检索已知spv序列后设计引物,将分离的pR<,st98>作为聚合酶链反应(PCR)的模板,反应扩增得到的阳性片段svpR和spvB分别与克隆质粒载体pGEM-T连接,转化宿主菌E.coli DH5α进行扩增.经限制性内切酶鉴定含重组质粒的阳性克隆后,分别进行核酸序列测定,并进行生物信息学分析.结论:伤寒杆菌质粒pR<,st98>除编码细菌抗药性外,还含有与细菌毒力相关的基因,提示质粒pR<,st98>是一种既编码细菌抗药性又增强细菌毒力的具有双重功能的"嵌合型"质粒.该研究为进一步了解耐药伤寒杆菌致病作用的分子机制提供了依据.第二部分乙型肝炎病毒HBx蛋白重组腺病毒载体的构建目的:构建可表达HBx蛋白的重组腺病毒载体,为研究HBx与肝癌发生的关系提供有效的手段.方法:首先采用限制性核酸内切酶从真核表达载体质粒pCDNA3.1-HBx得到HBx基因;将HBx基因与穿梭质粒连接,得到含目的基因的重组穿梭质粒;经线性化后和腺病毒骨架质粒共转化原核细胞,通过同源重组得到重组腺病毒质粒载体;经线性化后由脂质体介导转染真核细胞,可得到含有HBx基因、能表达HBx蛋白的重组病毒.并对重组病毒进行病毒滴度测定.