IRF-7对草鱼(Ctenopharyngodon idella)Ⅰ型干扰素转录的调控

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干扰素(IFN)是一种具有抗病毒,抗肿瘤以及调节自身免疫等多种功能的糖蛋白。干扰素调节因子(IRF)因对干扰素具有转录调控功能而得名。干扰素调节因子1、5、7在调控干扰素以及干扰素刺激基因(ISGs)转录方面扮演着重要作用。在哺乳类动物中有关IRF调控机理的研究已有很多,但在鱼类中有关他们研究还比较少。草鱼是我国重要的经济鱼种,本文主要研究了草鱼IRF-7对Ⅰ型干扰素的调控机制。在实验室已克隆1个草鱼Ⅰ型干扰素基因组及其启动子序列的基础上,我们对其序列特征进行了分析,发现草鱼Ⅰ型干扰素基因启动子包含启动子也包含一个典型的TATA box,4个IRF-E结合位点,两个NF-κB位点以及一个ATF-2/c-Jun结合位点。根据其启动子的结构特征,我们克隆了含有不同结合位点的CiIFN启动子片段CiIFNP1-P9。同时,在克隆草鱼IRF-7的基础上,分析了CiIRF-7在草鱼肝,脾,肾中的表达水平,发现CiIRF-7经poly I:C诱导之后表达水平上调。并且通过原核表达系统获得草鱼IRF-7DBD结构域蛋白。通过凝胶阻滞分析得出草鱼IRF-7能够在体外与IFN各个启动子片段结合,为证明它们对IFN的调控作用提供了可靠的证据。我们还利用共转染实验技术,将CiIRF-7和IFN启动子片段分别转染至小鼠骨髓瘤细胞和草鱼肾细胞,结果表明CiIRF-7能够诱导上调CiIFN启动子,揭示了草鱼IRF-7对Ⅰ型干扰素的正调控作用。本文同时检测了CiIRF-1在草鱼各组织的表达水平,结果表明CiIRF-1在草鱼各组织内具有微量的组成性表达,也能够被poly I:C诱导上调。我们还原核表达了CiIRF-5DBD结构域蛋白,并且通过凝胶组织实验证明CiIRF-5DBD结构域蛋白能够与不同CiIFN启动子片段结合。
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