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背景:胃癌是全世界癌症死亡排名第四的常见肿瘤,由于其早期诊断较困难、化疗导致的器官系统毒性及耐药性等原因,胃癌仍是世界上最常见和最致命的肿瘤之一。因此,寻找新的胃癌药物治疗靶点尤为重要。研究发现microRNA通过调控靶基因的表达影响细胞的增殖和迁移。目的:探讨miR-4316通过下调VEGF-A抑制胃癌细胞增殖和迁移及其临床意义。方法:本研究使用了胃癌组织、三种胃癌细胞系MGC-803、BGC-823、SGC-7901及一种人正常胃粘膜细胞系GES-1。通过qRT-PCR检测GES-1、MGC-803、BGC-823和SGC-7901的miR-4316和VEGF-A基因的表达。分别将各组（miR-4316-模拟物、miR-4316-抑制剂和NC）或（si-VEGF-A、miR-4316-模拟物+si-VEGF-A、miR-4316-抑制剂+si-VEGF-A和NC）转染SGC-7901和BGC-823细胞48小时后提取蛋白,通过蛋白质印迹实验测定VEGF-A和c-Met的蛋白表达水平。通过细胞增殖、迁移和集落形成实验对miR-4316的功能进行分析。通过CCK-8实验研究miR-4316对胃癌细胞增殖的影响。通过各组间（miR-4316模拟物、miR-4316抑制剂和NC）或（si-VEGF-A、miR-4316模拟物+si-VEGF-A、miR-4316抑制剂+si-VEGF-A和NC）划痕试验来分析miR-4316调控VEGF-A对胃癌细胞株迁移能力的影响。在各组（miR-4316模拟物、miR-4316抑制剂和NC）或（si-VEGF-A、miR-4316模拟物+si-VEGF-A、miR-4316抑制剂+si-VEGF-A和NC）中转染miR-4316或将miR-4316与VEGF-A共转染后,采用免疫荧光染色法检测VEGF-A的表达。运用生物信息学方法和荧光素酶报告基因方法验证mi RNA和其靶向的VEGF-A的3非翻译区（3-UTR）结合。通过皮下接种miR-4316-mimic转染胃癌细胞系进行整体实验。结果:qRT-PCR结果表明,人胃癌组织与癌旁组织相比miR-4316表达水平显着下调;胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901和BGC-823与对照组GES-1细胞相比miR-4316表达明显下调。然后所选择的SGC-7901和BGC-823细胞系在两个SGC-7901和BGC-823细胞,因为的miR-4316表达下调。在SGC-7901和BGC-823细胞系中转染miR-4316-模拟物和miR-4316抑制剂,通过qRT-PCR检测miR-4316的表达,结果显示miR-4316-模拟物上调miR-4316水平,miR-4316-抑制剂下调miR-4316水平。用miR-4316-模拟物和miR-4316抑制剂转染SGC-7901和BGC-823细胞系后,通过CCK-8实验、划痕实验、transwell和集落形成实验发现miR-4316-模拟物能够抑制胃癌细胞增殖、迁移和集落形成;而miR-4316-抑制剂能够促进胃癌细胞增殖、迁移和集落形成。荧光素酶报告基因实验证明miR-4316的靶基因为VEGF-A。qRT-PCR结果表明,胃癌组织与癌旁组织相比VEGF-A表达显着升高;胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901和BGC-823与人胃粘膜GES-1细胞相比,VEGF-A表达显着升高。Mi R-4316-模拟物和miR-4316-抑制剂转染SGC-7901和BGC-823细胞后,通过qRT-PCR检测发现VEGF-A在转染miR-4316-模拟物的细胞中明显低表达,而在转染miR-4316抑制剂的细胞中明显高表达。蛋白质印迹结果显示,在胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中转染miR-4316模拟物后,VEGF-A和c-Met表达低于对照组;转染miR-4316抑制剂后,VEGF-A表达明显高于对照组。用qRT-PCR检测转染si-VEGF-A和对照组的两个胃癌细胞系,结果表明转染si-VEGF-A的细胞组VEGF-A与c-Met的表达均显着低于对照组。用si-VEGF-A,miR-4316-模拟物加si-VEGF-A或miR-4316-抑制剂加si-VEGF-A共转染胃癌细胞系,通过蛋白质印迹检测分析发现si-VEGF-A组中VEGF-A和c-Met的表达显着降低,而miR-4316加si-VEGF-A中的VEGF-A和c-Met的表达与对照组相比显著降低;miR-4316-抑制剂加si-VEGF-A与对照组相比,VEGF-A和c-Met的表达没有明显变化。此外,CCK-8实验、集落形成实验、划痕实验和transwell实验结果表明,实验组si-VEGF-A+miR-4316-模拟物+si-VEGF-A与对照组相比胃癌细胞的增殖、生长和迁移显著降低。免疫荧光分析结果表明,实验组si-VEGF-A+miR-4316-模拟物+si-VEGF-A与对照组相比VEGF-A表达水平显著降低。整体实验结果表明,接种miR-4316-模拟物的BGC-823胃癌细胞株裸鼠的肿瘤生长明显降低。结论本研究证明了miR-4316可直接靶向VEGF-A基因,通过下调VEGF-A基因抑制胃癌细胞的增殖和迁移。MiR-4316在胃癌细胞中是抑癌基因,有望成为胃癌治疗的新靶点。