手足口病是由肠道病毒引起的传染病,多发生于5岁以下儿童,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,严重者可导致死亡。近年来,手足口病频繁多发,呈上升趋势,已成为危害儿童身体健康的急性传染病之一。目前国内外尚无预防用药以及西药特效抗肠道病毒药物,主要是对症处理和脏器支持治疗。与西药相比,中药制剂抗病毒作用虽然缓慢,但是安全系数高,疗效确切,功效全面,无明显的副作用。针对这种现状,更加凸显出中医药辨证治疗灵活性、有效性和针对性的优势,继承和发扬中医药治疗的优势和特色对于提高手足口病的临床疗效至关重要。经过长期临床实践,清热抗毒口服液具有良好的临床效果。但因传统煎剂口感稍差、服用量大,不便于小儿服用。本课题旨在探索一种治疗小儿手足口病的纯中药制剂——清热抗毒口服液的制备工艺的优化与质量标准的建立,以及质量控制的方法。通过正交设计对清热抗毒口服液的提取浓缩工艺进行优选,提高成方药材的煎出率,避免了传统煎剂的弊端,提高了药物的生物利用度。通过探索清热抗毒口服液的质量标准,建立以盐酸小檗碱为主要活性成分为质量控制指标的分析方法。通过提取工艺的优选及质量标准的建立,为手足口的临床治疗提供新的思路方法,改变目前西医治疗手足口病无特异性方药的现状,并为降低重症手足口病的发生率提供有效安全的药物。第一部分清热抗毒口服液制备工艺研究目的:通过加权综合评分法和正交设计试验优选处方药材最佳提取工艺。确定清热抗毒口服液的最佳制备工艺流程。方法:采用正交设计方法,以相对密度与盐酸小檗碱的薄层扫描含量为考察指标,考察提取时间、加水量(倍)、提取次数对提取效果的影响,综合评分法优化实验数据,以确定最佳提取工艺。结果:以相对密度、盐酸小檗碱含量为考察指标,各因素对综合评分的影响:加水量对盐酸小檗碱的提取影响最大,提取次数次之,提取时间对盐酸小檗碱的提取影响最小。处方药材加水煎煮2次,第一次提取加10倍量水,煎煮1小时,第二次提取加8倍量水,煎煮1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.05-1.08的溶液,离心,加入适量的糖浆和苯甲酸钠,搅匀,灌装,灭菌,即得。结论:通过引入加权综合评分法和正交设计优选出的制备工艺流程合理、生产过程简单,节约成本,可操作性强,切实可行。第二部分清热抗毒口服液质量标准的建立目的:建立采用高效液相色谱法测定清热抗毒口服液中盐酸小檗碱的含量测定方法。建立清热抗毒口服液的质量标准,为清热抗毒口服液提供以盐酸小檗碱为主要活性成分作为质量控制指标的分析方法。方法:(1)对处方药材白茅根、钩藤、黄连进行了薄层色谱鉴别。(2)高效液相色谱条件的优化:选择合适的固定相、流动相,以及检测方法等色谱条件,以盐酸小檗碱色谱峰与其他峰完全分离。(3)系统适应性试验:在已确定的色谱条件下,考察待测成分的色谱峰分离度、理论塔板数、对称因子等是否符合要求。(4)专属性试验:检验在色谱条件下阴性供试品对样品是否有干扰。(5)制备标准曲线:进行最低检测限试验、精密度试验、稳定性试验和重复性试验。(6)加样回收率试验。(7)样品含量测定。(8)清热抗毒口服液质量标准的建立。结果:(1)白茅根、钩藤、黄连的薄层色谱鉴别阴性无干扰,列入正文,蒲公英的薄层鉴别阴性有干扰,故不列入正文。(2)提取方法:以盐酸-甲醇(1:100)为溶剂,超声40min为最佳提取方法。(3)高效液相色谱条件的优化:采用色谱柱为岛津C18(4.6×150mm,5μm);以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(25:75)为流动相进行洗脱;检测波长为265nm;流速为1.0ml/min。(4)系统适应性试验:在此色谱条件下,盐酸小檗碱色谱峰的理论塔板数大于3000,与相邻色谱峰的分离度大于1.5。(5)专属性试验:在上述色谱条件下进样,阴性对照品对样品无干扰。(6)标准曲线的制备:盐酸小檗碱进样量在0.05-5μg/ml范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.9999。(7)最低检测限试验:盐酸小檗碱的最低检测限为0.025μg/ml。(8)精密度试验:盐酸小檗碱的有效峰面积的RSD为0.13%。(9)稳定性试验:盐酸小檗碱的有效峰面积的RSD为0.6%,样品在8小时内稳定。(10)重复性试验:以盐酸小檗碱的峰面积计算所得重现性试验的RSD为1.8%。(11)加样回收率试验:盐酸小檗碱的平均加样回收率为101%,RSD为1.86%。(12)样品含量测定:在所建立的色谱条件下,对不同批次的清热抗毒口服液中盐酸小檗碱的含量进行测定,并计算样品中有效成分的含量。结论:采用高效液相色谱法测定清热抗毒口服液中盐酸小檗碱含量。该方法具有分析时间短,专属性强,线性范围宽,精密度和准确度良好等优点,可以用于清热抗毒口服液的质量控制,为保证制剂质量提供科学、可行的质量控制方法。