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Leptin是一种与动物的能量开支、生殖和免疫的调节有关的多肽类激素,而其生物学功能是由leptin受体介导的,它在水牛体内的作用部位以及相关研究资料十分有限。本研究的目的在于分析广西沼泽型水牛leptin b型受体的基因克隆和序列分析,并检查该受体在水牛脑垂体和卵巢组织中的分布。根据水牛leptin b型受体基因以及Genbank中水牛leptin b型受体基因和其他哺乳动物相似基因进行分析。利用oligo软件设计出一对扩增水牛leptin b型受体基因保守区序列的引物。上游引物:5'-GGTGCCAGCAACTACAGA-3';下游引物:5'-GGGGACAACACTCTTGAC-3'。然后以成年雌性广西沼泽型水牛脑垂体总RNA为模板,通过RT-PCR法扩增出长度为510bp的广西沼泽型水牛leptin b型受体基因的保守序列。扩增产物经胶回收纯化后,连接pMD18-T载体上进行测序。测序结果显示,经核苷酸同源性比对该片段与印度水牛leptin b型受体基因同源性为97.4%。为进一步研究leptin b型受体基因的生物学功能提了供理论基础。
为leptin b型受体基因在水牛脑垂体组织和卵巢组织中定位,实验采用组织原位杂交技术,用扩增得到的水牛leptin b犁受体基因序列为模板,制备出用于组织原位杂交的cDNA地高辛标记探针。川制备好的leptin b型受体cDNA探针与成年广西沼泽型水牛的卵巢组织,脑垂体组织石蜡切片进行组织原位杂交并严格设立阴性空白对照组。结果发现leptin b型受体mRNA广泛分布于脑垂体中,特别是在嗜碱性细胞内呈分布较多,由此推测leptin b型受体在脑垂体内可与FSH(卵泡刺激素)LH(黄体生成素)等激素协调作用。该受体在卵巢的各级卵泡周围基质颗粒细胞中都有分布,在卵巢基质等其他部位中未能检测到,说明leptin对卵巢的发育和分泌具有密切关系。