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第一部分：2型糖尿病大血管病变患者血清IL-17水平变化及意义[摘要]目的探讨2型糖尿病(type 2 diabetes, T2DM)大血管病变患者血清白细胞介素-17(Interleukin-17, IL-17)表达水平及意义,并与相关的临床及实验室指标进行关联性分析。方法162例T2DM患者,根据是否合并大血管病变,分为大血管病变组90例和无血管病变组72例,另选同期健康查体者68例作为正常对照组。采用特异的单克隆抗体放大酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)法,测定空腹静脉血中IL-17等炎症因子水平,统计IL-17与各指标间的关系,分析其影响因素。同时根据部分T2DM患者颈动脉内膜中层厚度(Intima-media thickness, IMT),以有无颈动脉增厚进行分组比较,并进行相关指标的统计学分析。结果T2DM合并大血管病变组血清IL-17、白细胞介素-23(Interleukin-23, IL-23)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平显著高于无血管病变组及正常对照组,T2DM无大血管病变组高于正常对照组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。其中T2DM合并颈动脉增厚组IL-17、白细胞介素-6(Interleukin-6, IL-6)水平明显高于无颈动脉增厚组(P<0.05)。大血管病变组血清IL-17与体重指数(Body MassIndex,BMI)、餐后2小时血糖(2 hour plasma glucose,2hPG)、超敏C反应蛋白(high sensitivity C-Reactive Protein, hs-CRP)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、 IL-23、IL-6、IL-1β呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)、白细胞介素-10 (Interleukin-10, IL-10)呈负相关。多元逐步回归分析显示IL-17、hs-CRP和HDL-C是 T2DM大血管病变的主要影响因素,IL-17与IL-23、TG和HDL-C之间有线性关系。结论T2DM大血管病变组和颈动脉增厚组血清IL-17表达均增高,提示IL-17参与糖尿病大血管病变的炎症反应过程。IL-17可能是T2DM大血管病变的独立危险因素,并可能通过IL-23炎症信号通路及TG、HDL-C指标的变化在糖尿病大血管病变发生、发展中发挥作用。第二部分：IL-17在糖尿病大血管中的表达及白藜芦醇的干预机制[摘要]目的研究糖尿病大鼠主动脉白细胞介素-17(Interleukin-17, IL-17)的表达及白藜芦醇的干预效应,并从表观遗传学角度探讨IL-17参与糖尿病大血管病变的潜在机制和白藜芦醇的保护性机制。方法将100只SD (Sprague Dawley)大鼠分为4组：对照组(normal group, NC)、正常干预组(normal interventional group, NB)、糖尿病组(diabetic group, DM)和糖尿病干预组(diabetic interventional group, DB), NB和DB组用白藜芦醇进行干预,通过免疫组化对IL-17表达进行组织学定位并测量大鼠腹主动脉壁厚度,蛋白质印迹(Western blotting, WB)、实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)及甲基化特异性PCR技术(Methyl-specific PCR, MSP),分别比较各组大鼠主动脉IL-17蛋白、mRNA的表达及其基因启动子区DNA甲基化水平的差异。结果免疫组化染色显示IL-17主要表达于DM组大鼠主动脉内膜,DM组与NC和DB组相比腹主动脉壁明显增厚(P<0.05)；DM组IL-17蛋白及mRNA表达水平较NC组增高(P<0.05),而NB和DB组则分别较NC和DM组下调；同时DM组IL-17 DNA甲基化水平显著低于NC组(P<0.01),而NB和DB组甲基化水平分别较NC和DM组上调。结论糖尿病大鼠主动脉IL-17表达增强,提示IL-17参与糖尿病大血管病变的炎症反应过程,白藜芦醇可抑制IL-17的表达,可能对糖尿病大血管病变有保护作用,两者的发生机制可能通过调控IL-17基因启动子区DNA甲基化水平来实现。第二部分：IL-17在糖尿病大血管中的表达及白藜芦醇的干预机制[摘要]目的研究糖尿病大鼠主动脉白细胞介素-17(Interleukin-17, IL-17)的表达及白藜芦醇的干预效应,并从表观遗传学角度探讨IL-17参与糖尿病大血管病变的潜在机制和白藜芦醇的保护性机制。方法将100只SD (Sprague Dawley)大鼠分为4组：对照组(normal group, NC)、正常干预组(normal interventional group, NB)、糖尿病组(diabetic group, DM)和糖尿病干预组(diabetic interventional group, DB), NB和DB组用白藜芦醇进行干预,通过免疫组化对IL-17表达进行组织学定位并测量大鼠腹主动脉壁厚度,蛋白质印迹(Western blotting, WB)、实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)及甲基化特异性PCR技术(Methyl-specific PCR, MSP),分别比较各组大鼠主动脉IL-17蛋白、mRNA的表达及其基因启动子区DNA甲基化水平的差异。结果免疫组化染色显示IL-17主要表达于DM组大鼠主动脉内膜,DM组与NC和DB组相比腹主动脉壁明显增厚(P<0.05)；DM组IL-17蛋白及mRNA表达水平较NC组增高(P<0.05),而NB和DB组则分别较NC和DM组下调；同时DM组IL-17 DNA甲基化水平显著低于NC组(P<0.01),而NB和DB组甲基化水平分别较NC和DM组上调。结论糖尿病大鼠主动脉IL-17表达增强,提示IL-17参与糖尿病大血管病变的炎症反应过程,白藜芦醇可抑制IL-17的表达,可能对糖尿病大血管病变有保护作用,两者的发生机制可能通过调控IL-17基因启动子区DNA甲基化水平来实现。第三部分：白藜芦醇对糖尿病大鼠主动脉炎症因子的表达和DNA甲基化水平的干预[摘要]目的研究促炎细胞因子如白细胞介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)及抗炎细胞因子如白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)在糖尿病大鼠主动脉中的表达,白藜芦醇对这些细胞因子的干预效应,并从表观遗传学领域探索炎症因子表达增强或减弱的潜在机制以及白藜芦醇的保护性机制。方法将实验对象SD (Sprague Dawley)大鼠分为4组：对照组(normal group, NC)、正常干预组(normal interventional group, NB)、糖尿病组(diabetic group, DM)和糖尿病干预组(diabetic interventional group,DB),NB和DB组用白藜芦醇进行干预。经过三个多月造模,分离大鼠主动脉,通过免疫组化对IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10表达进行组织学定位并测量大鼠腹主动脉壁厚度,采用蛋白质印迹(Western blotting, WB)、实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)及甲基化特异性PCR技术(methylation-specific PCR, MSP),分别比较各组大鼠主动脉各炎症因子蛋白、mRNA的表达及基因启动子区DNA甲基化水平的差异。结果免疫组化染色显示各炎症因子主要表达于DM组大鼠主动脉内膜,DM组与NC和DB组相比腹主动脉壁明显增厚(P<0.05);DM组IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ蛋白及nRNA表达水平较NC组明显增高(P<0.05),而白藜芦醇干预组(NB和DB)组表达则分别较NC和DM组下调；同时在DM组IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ基因的特异CpG位点呈现出显著低于NC组的DNA甲基化水平(P<0.01),而NB和DB组甲基化水平分别较NC和DM组上调。相反的,IL-10在高糖环境中其基因启动子区特异CpG位点甲基化程度高,致蛋白及mRNA呈现为低表达反应,而白藜芦醇干预后则可逆转这种变化。结论糖尿病大鼠主动脉促炎因子表达增强而抗炎因子表达减弱,提示糖尿病大血管病变是多种细胞因子参与下的炎症反应过程。白藜芦醇可抑制IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达,因此可能对高糖环境中的大血管具有保护作用。炎症因子表达的潜在机制和白藜芦醇的保护性机制可能是通过调控来自表观遗传学的一个基因沉默信号DNA甲基化水平来实现的。