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研究目的嗜酸细胞性胃肠炎(Eosinophilic gastroenteritis, EG)是以胃肠道的某些部位弥漫性或局限性嗜酸性粒细胞(eosinophil EOS)异常浸润为特征的胃肠道疾病。近年来国内外有用白三烯受体拮抗剂孟鲁司特成功治疗EG的临床病例报道。本实验通过建立卵清蛋白(Ovalbumin OVA)诱导的EG小鼠模型,观察孟鲁司特治疗EG小鼠的疗效及其作用机制,为孟鲁司特治疗EG提供科学的理论依据。研究方法50只雌性Balb/c小鼠,适应性喂养1周后,按随机原则分为正常对照组(n=10)和OVA处理组(n=40)。第1天OVA处理组小鼠腹腔注射OVA和AL(OH)3溶液(50ug/lmg)一次以基础致敏,第15天OVA处理组小鼠腹腔注射用生理盐水配制的OVA溶液(50ug)一次达强化致敏,第20-24天给予OVA (50mg)隔日灌胃激发胃肠道过敏。正常对照组各时间点给予等剂量磷酸盐缓冲盐水(Phosphate buffer saline PBS)处理,制备EG小鼠模型。造模后观察小鼠一般表现,检测外周血EOS、IgE含量,随机处死小鼠10只(正常对照组2只和OVA处理组8只),观察小鼠胃肠病理,以验证造模成功。造模成功后,将OVA处理组再随机分为模型组、强的松+孟鲁司特组,孟鲁司特组和强的松组8只／组。第26天起模型组及各药物治疗组继续给予OVA隔日灌胃激发胃肠反应,同时药物治疗组分别给予强的松(3mg/Kg)、孟鲁司特(1.5mg/Kg)灌胃,正常对照组、模型组给予相应体积的生理盐水连续灌胃。第40天取材,常规计数法检测小鼠外周血EOS含量,应用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测小鼠血清IgE、白三烯D4(LTD4)及小鼠空肠组织匀浆白介素-5(IL-5)、嗜酸细胞趋化因子-1(Eotaxin-1)含量。HE染色观察小鼠胃肠粘膜组织病理学变化。免疫组化方法检测小鼠空肠组织主要碱性蛋白(major basic protein,MBP)表达。荧光定量PCR技术测定小鼠空肠组织半胱氨酰白三烯受体-1(cysteinyl leukotriene receptors.1,CysLTRl)基因表达。结果1.临床症状正常对照组小鼠毛发光泽,精神良好,活动正常。OVA处理组小鼠在激发胃肠道过敏后,出现活动减少、精神不佳、竖毛、腹泻症状。给予药物治疗2周,小鼠上述症状与模型组比较均有所好转,各给药组间比较无明显差异。2.体重变化造模后,OVA处理组小鼠体重明显低于正常对照组(20.65±0.78gvs21.25±0.88g,P<0.05)。给药治疗2周后,孟鲁司特+强的松组、孟鲁司特组、强的松组小鼠体重下降有所改善,与模型组比较有显著差异(20.91±0.83g#、21.30±1.16g##、21.31±1.OOg##vs19.69±0.91g,#P<0.05,##P<0.01)。各药物治疗组间比较无统计学意义(P>0.05)。3.外周血EOS计数造模完成后,检测小鼠外周血中EOS计数,结果显示OVA处理组小鼠EOS较正常对照组明显升高[12.00±2.82(×109/L)vs6.45±1.92(×109/L)P<0.01]。连续给药治疗2周后,孟鲁司特+强的松组、孟鲁司特组、强的松组小鼠外周血EOS含量明显降低,与模型组比较有显著差异[14.38±4.14(×109/L)##、16.38±2.67(×109/L)#、13.88±3.80(×109/L)##旧21.13±4.88(×109/L),#P<0.05,##P<0.01]。各药物治疗组间比较无统计学意义(P>0.05)。4.胃、肠组织病理正常对照组胃、肠粘膜结构正常,厚薄均匀、规则、完整,未见水肿、充血及炎症细胞浸润,粘膜上皮腺细胞均正常,上皮细胞未见坏死、脱落。OVA处理组胃粘膜变薄、断裂,下层充血,粘膜上皮细胞近胃腔端腺上皮脱落,有炎症细胞浸润。肠组织上皮细胞水肿、并见局灶性坏死、脱落,有大量炎性细胞浸润。给药治疗2周后,各给药组小鼠胃、肠粘膜各层结构基本正常,仅见轻微充血及炎症细胞浸润,上皮细胞结构基本正常。5.空肠组织MBP的表达正常对照组小鼠空肠MBP的表达弱(+),模型组小鼠空肠MBP表达明显增强(+++),各给药组空肠MBP表达均较模型组减弱(+)。6.血清IgE含量造模后,OVA处理组小鼠血清IgE含量较正常对照组明显升高(249.90±28.66ng/ml vs174.24±17.09ng/ml,P<0.01).药物治疗2周后,孟鲁司特+强的松组、孟鲁司特组、强的松组小鼠外周血LgE含量明显降低,与模型组比较有显著差异(220.78±21.02ng/ml..214.36±19.66ng/ml##.202.68±16.97ng/ml##vs243.17±17.48ng/ml,#P<0.05,##P<0.01).各药物治疗组间比较无统计学意义(P>0.05)。7.血清LTD4含量药物治疗2周后,模型组小鼠血清LTD4含量较正常对照组明显升高(174.73±19.55ng/ml vs10g.38±14.90ng/ml,P<0.01).孟鲁司特+强的松组和孟鲁司特组小鼠血清LTD4含量明显降低,与模型组比较有显著差异(126.39±35.93ng/ml.131.23±29.68ng/ml vs174.73±19.55ng/ml,P<0.01)。而强的松组小鼠血清LTD4含量与模型组比较无统计学意义(159.31±45.13ng/ml vs174.73±19.55ng/ml,P>0.05).8.空肠组织CysLTRl mRNA表达药物治疗2周后,模型组小鼠空肠组织CysLTRl mRNA表达较正常对照组明显增高(2.21±0.22vs1.16±0.36,P<0.01)。孟鲁司特+强的松组和孟鲁司特组CysLTRl mRNA表达明显降低,与模型组比较有显著差异(1.71±0.54..1.63±0.33##vs2.21±0.22,.P<0.05,##P<0.01).强的松组该基因表达略降低,与模型组比较无统计学意义(2.01±0.26vs2.21±0.22,P>0.05)。各给药治疗组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。9.空肠组织匀浆IL-5含量药物治疗2周后,模型组小鼠空肠组织匀浆IL-5含量较正常对照组明显升高(162.59±17.93ng/g vs103.90±12.48ng/g,P<0.01).孟鲁司特+强的松组、孟鲁司特组、强的松组小鼠空肠组织匀浆IL-5含量明显降低,与模型组比较有显著差(127.29±30.96ng/g##,136.20±25.50ng/g#,113.57±34.26ng/g##vs162.59±17.93ng/g,#P<0.05,##P<0.01).各药物治疗组间比较无统计学意义(P>0.05)。10.空肠组织匀浆Eotaxin-1含量药物治疗2周后,模型组小鼠空肠组织匀浆Eotaxin-1含量较正常对照组明显升高(468.92±59.97ng/g vs291.77±50.77ng/g,P<0.01).孟鲁司特+强的松组和孟鲁司特组小鼠空肠组织匀浆Eotaxin-1含量明显降低,较模型组有显著差异(364.19±75.81ng/g,394.99±30.00ng/g vs468.92±59.97ng/g,P<0.01)。强的松组Eotaxin-1含量略有减低,与模型组比较无统计学意义(424.77±53.77ng/g vs468.92±59.97ng/g,P>0.05)。但各给药治疗组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.应用孟鲁司特治疗EG小鼠模型,可使小鼠临床症状缓解,外周血EOS计数下降,胃肠组织病理损伤修复,达到治疗效果,且与强的松疗效相似。2. EG小鼠模型空肠组织CysLTRl mRNA表达上调,血清LTD4水平增高,说明白三烯在GE的发病中起一定作用。3.孟鲁司特可通过与CysLTs竞争性结合肠组织中受体发挥其拮抗作用,还可抑制EOS.IgE及LTD4参与的炎症反应,降低EG小鼠模型IL-5和Eotaxin-1水平,抑制因此介导的胃肠组织中EOS侵润,减少EOS脱颗粒产生的主要碱性蛋白(MBP),起到调节炎症反应作用,是其防止EG胃肠损伤的重要机制。总之,孟鲁司特可通过抑制EOS、IgE、LTD4、IL-5及Eotaxin-1多途径介导的炎症反应而发挥治疗作用,疗效与强的松相当。