【摘 要】
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核糖体蛋白（ribosomal protein, RP）是组成核糖体的重要单位,其主要功能是参与核糖体的组装和蛋白质的翻译。核糖体由大量核糖体蛋白以及核糖体RNA （rRNA）在核仁中组装完成。大约有150种rRNA基因和137种核糖体蛋白编码基因作为候选完成基因转录这一巨大的工程。本实验室前期己成功敲除核糖体蛋白基因L32-1和L32-2,并发现敲除菌株在YPD液体培养基中培养时,出现数以百计的
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核糖体蛋白（ribosomal protein, RP）是组成核糖体的重要单位,其主要功能是参与核糖体的组装和蛋白质的翻译。核糖体由大量核糖体蛋白以及核糖体RNA （rRNA）在核仁中组装完成。大约有150种rRNA基因和137种核糖体蛋白编码基因作为候选完成基因转录这一巨大的工程。本实验室前期己成功敲除核糖体蛋白基因L32-1和L32-2,并发现敲除菌株在YPD液体培养基中培养时,出现数以百计的细胞凝集在一起形成肉眼可见细胞团的细胞凝絮现象（flocculation）。为进一步了解引起酵母细胞絮凝的原因,本文在此基础上,通过查阅文献（Anabelle Decottignies et al.,2003）[2],从敲除不引起致死的酵母基因中随机选择敲除核糖体蛋白基因L21-2和L9-2以及非核糖体蛋白基因SPBC1347.09, SPAC732.02c, SPBC13G1.02, sck1。通过PCR获得敲除片段的上下游基因及筛选抗性基因KanMX6,最后将三片段同时加入PCR管中,用同源臂的上游P1和下游P2通过PCR获得全长的敲除片段。应用Li-Ac转化法,将敲除片段导入受体菌SP-Q01,YPD液体培养基培养之后涂G418抗性平板,筛选阳性克隆。对阳性克隆提取基因组PCR验证,保存验证正确的阳性菌株。通过对这六株基因敲除菌株的培养,细胞形态的观察和生长曲线的测定,发现敲除核糖体蛋白基因的菌株长势缓慢,且都有细胞凝絮现象；而敲除非核糖体蛋白基因的菌株则无此现象。到此我们可以初步判断裂殖酵母细胞核糖体蛋白表达水平不足造成的核糖体损伤可以引起酵母细胞的凝絮现象。对于具体的引起细胞凝絮的作用机制还需更深入的验证。
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