目的隐性脊柱裂(spina bifida occulta,SBO),是由于脊柱骨质的先天缺陷,导致局部椎弓有异常裂隙,但表面有皮肤覆盖,无脊膜或神经组织膨出,多发生在L5-S1平面。隐性脊柱裂患者常见多种类型的临床症状,主要包括局部皮肤异常、尿失禁、尿路感染、便秘、下肢深反射亢进、后背痛、内翻足、进展性脊柱侧弯、双腿生长不对称等。以上症状多数由于合并脊髓栓系而引起,脊髓和神经根由于被压迫或牵引而未能正常上移,造成低位脊髓,马尾圆锥和终丝神经缺血缺氧,导致潜伏性和进展性的神经系统缺陷。隐性脊柱裂常因合并椎管内其他畸形而导致脊髓栓系,如椎管内脂肪瘤、脊髓纵裂、脊髓空洞症、脊髓积水等。尚有部分病例未并发脊髓栓系而出现症状,其发病机制不清。另外隐性脊柱裂可能伴发其他畸形,如先天性脊柱侧弯或明显的肢体短缩、末端脊髓积水、脊髓纵裂等,轴外系统畸形最常见的是肛门直肠畸形及泌尿生殖系统畸形(肾脏畸形)。隐性脊柱裂发生率较高,约为正常人群的20%左右。但目前我们对其认识较少,仅有药物或基因敲除动物模型的制作、组织HE染色、凋亡、神经示踪等研究,对其发病机制及病理改变认识有限,而且没有良好的预防和治疗措施。因此,针对隐性脊柱裂畸形的胚胎发生规律和病理改变还有很大的研究空间,其研究成果有利于我们对这一发病率较高的疾病的深入认识,更可以进一步指导畸形的产前预防和早期有效治疗,对减少出生缺陷、提高人口素质具有极其重要意义。无机气体分子一氧化氮(NO)是非肾上腺素能、非胆碱能(nonadrenergicnoncholinergic,NANC)的抑制性神经递质,是一种重要的神经信息物质,大量的研究表明:NO具有重要的信息传递作用。一氧化氮合酶(NOS)分三种类型,其中神经元型一氧化氮合酶(NOS1)广泛存在于中枢及周围神经系统及心血管、消化、泌尿生殖系统等的神经通路中,通过催化产生NO而与这些系统的功能均密切相关。NOS1近些年来倍受学术界的瞩目,在脑损伤、尿失禁、缺血再灌注、应激等情况下的研究较多。这些研究表明,胃肠组织可在NOS1催化下产生NO,参与对肠道平滑肌收缩的NANC神经调节。泌尿系统中,尿道外括约肌复合体和尿道周围盆底横纹肌协同作用负责产生尿道压力,防止尿失禁的发生。且研究发现人类尿道壁内横纹括约肌中含有NOS染色阳性的神经纤维和肌纤维。因此,在隐性脊柱裂中研究脊髓中NOS1水平,有利于了解其脊髓病理特点,有助于对临床症状做以解释。临床上可见隐性脊柱裂合并椎管内脂肪瘤,并常因此导致脊髓栓系的产生。脊髓和神经根由于被脂肪瘤压迫不能维持其正常位置,更重要的是造成马尾圆锥和终丝神经缺血缺氧,进而影响神经系统的功能。本实验通过动物模型研究隐性脊柱裂椎管内是否有脂肪瘤多发,并研究其对周围脊髓和神经纤维的影响。尼氏体被称为核蛋白体,是合成蛋白质的主要场所。在病理情况下,尼氏体对缺血、缺氧、中毒等极为敏感,故尼氏体可以作为观察神经细胞损害的灵敏指标。本实验以脊髓内神经元中尼氏体含量为观察指标,观察隐性脊柱裂脊髓神经元功能是否受到影响。本实验利用丙戊酸致畸制作隐性脊柱裂畸形的胎鼠动物模型,并以脊髓内NOS1含量、脂肪含量和神经元内尼氏体含量为观察指标,研究隐性脊柱裂胎鼠脊髓的病理改变特点,并进一步探讨其发病机制。方法在Wistar大鼠孕9天于9∶00和16∶00,分别给予实验组孕鼠20%丙戊酸钠(VPA)350mg/kg(总量700mg/kg~*d)后肢皮下注射,对照组孕鼠在相应时间点给予0.5ml生理盐水后肢皮下注射。大鼠于孕21天剖宫取出胎鼠,记录总胚胎数、活胎数、死胎数及吸收胎数,检查外观判定是否有外观可见畸形并记录。取胎鼠脊柱标本阿尔新蓝软骨染色后实体显微镜下数码相机采集脊柱软骨染色图像,经计算机软件测量出腰4到骶3每个椎体椎弓两个软骨端距离并判定是否存在隐性脊柱裂。采集图像后部分标本制作腰骶段脊柱横断面冰冻切片,通过免疫荧光染色方法测定脊髓中NOS1阳性细胞数量,通过油红O染色观察脊髓中脂肪含量。其余标本制作腰骶段脊柱横断面石蜡切片,通过甲苯胺蓝染色观察脊髓神经元中尼氏体含量及神经元形态。实验数据应用SPSS 12.0统计软件包,采用独立样本t检验对数据进行统计学分析(取双侧检验),p＜0.05为差异有显著性。结果对照组60只胎鼠椎弓软骨端距离均在正常参考值范围,无隐性脊柱裂畸形出现。实验组92只胎鼠中腰骶段椎弓软骨间距离大于正常参考值范围的有87只,判定为隐性脊柱裂(发生率为95%)。正常组NOS1阳性神经元数目较少,胞浆着色程度较深,细胞的形状大小及分布均匀;畸形组中NOS1阳性神经元明显多于正常组(p＜0.01),部分细胞胞浆轻度着色,细胞形态及分布不规则。脂肪染色结果正常组及畸形组胎鼠脊髓内均未见被油红O染成红色的中性脂肪组织,周围脊膜处可见散在少量染色阳性的脂肪组织,两组间无显著差异。尼氏体染色正常组神经元数目较多、色深;畸形组神经元数目明显减少(p＜0.01),染色变浅,胞浆内尼氏体减少或缺失,光密度值下降(p＜0.01),可见肿胀变圆的神经元。结论本实验结果显示隐性脊柱裂胎鼠腰骶段脊髓中NOS1分泌增多,尼氏体含量减少,提示这可能是隐性脊柱裂出现临床症状的重要病理学基础之一。本实验观察到隐性脊柱裂脊髓的部分病理改变特点,进而对其发病机制进行了初步探索。为下一步的研究工作提供了研究基础。