目的 通过研究FN和VEGF对胶质瘤细胞和血管内皮细胞相互作用的影响及与侵袭的关系;同时,采用基因工程技术把胶质瘤细胞和血管内皮细胞相互作用的刺激因子VEGF和抑制因子内皮抑素分别或同时转染至C₆细胞上,通过观察其阳性克隆子在裸鼠皮下移植瘤的微生态系统及重构后的肿瘤组织的形态学特征,来初步探讨胶质瘤细胞和血管内皮细胞相互作用对肿瘤微生态系统与组织重构的影响及规律。 方法 ①在体外建立不同的C₆细胞和人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的共培养系统,利用电镜技术研究胶质瘤细胞和血管内皮细胞相互作用的特征性结构—血瘤屏障的形态特征及与人体胶质瘤组织中血瘤屏障的区别;免疫细胞化学技术鉴定胶质瘤细胞和血管内皮细胞相互作用后的层粘连蛋白（Laminin,LN）在血管内皮细胞上的表达变化,,以期建立一种既可以排除体内复杂因素的影响,又接近于肿瘤体内生长的内环境的,同时又能满足研究要求的胶质瘤细胞和血管内皮细胞的相互作用系统。②在体外利用Transwell共培养系统对HUVECs和C₆胶质瘤细胞进行共培养;RT—PCR和免疫细胞化学方法检测经共培养后C₆细胞和HUVECs上FN的基因转录及蛋白的表达情况;采用体外快速侵袭力测定法检测不同功能状态的HUVECs对C₆细胞侵袭力的影响及在FN抗体封闭下的变化;同样的方法检测不同状态的C₆细胞对HUVECs迁移力的影响及在VEGF和FN抗体封闭下对HUVECs迁移力的影响。③利用RT—PCR法从1日龄大鼠脑组织中扩增出内皮抑素和正义或反义VEGF₁₆₄基因,并将获得的基因依次重组入真核表达载体pBud4.1CE上。重组子鉴定后利用脂质体方法转染C₆细胞,Zeocin抗性筛选,Western-blot方法和ELISA方法检测鉴定阳性克隆子。把鉴定后的阳性克隆子接种裸鼠皮下,观察内皮抑素基因和/或反义/正义VEGF对C₆胶质瘤体内生长的影响,光镜和电镜技术系统观察比较了转染有内皮抑素和反义/正义VEGF的C₆胶质瘤细胞在裸鼠皮下的移植瘤标本中重构的TMES的形态学特