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第一部分 缺血预处理对沙土鼠脑缺血再灌注损伤海马神经元ERK、JNK活性的影响;目的:探讨缺血预处理对沙土鼠脑缺血再灌注损伤海马神经元ERK、JNK活性的影响.方法:采用沙土鼠5 min前脑缺血再灌注损伤模型.随机分为假手术组(SH),预处理对照组(IC),缺血预处理组(IP),脑缺血再灌注组(IR).各组根据再灌注时间不同,又分Ir 15 min、Ir 2 h、Ir 4 h、Ir 6 h、Ir 1d、Ir 3 d、Ir 5 d、h 7 d 8个亚组.在预定时间点行开阔法行为学检查、组织形态学检查、TUNEL法检测海马CA1/3区凋亡细胞、免疫组织化学SP法测定磷酸化ERK(p-ERK)和磷酸化JNK(p-JNK)在海马区的变化.结论:脑缺血可导致p-ERK及p-JNK在海马各亚区的差异性表达.缺血预处理可能通过抑制CA1区JNK磷酸化、增强CA3区ERK活性而保护海马细胞.第二部分 ERK和JNK特异性激动剂和拮抗剂对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的影响;目的:观察ERK和JNK特异性激动剂和拮抗剂能否模拟或抵抗脑缺血预处理效应,进一步探讨ERK和JNK在脑缺血预处理中的作用.方法:采用沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型.随机分为Curcumin组(CU):ERK激动剂Curcumin 20 mg/kg在5 min脑缺血前1 h腹腔注射;PD98059组(PD):ERK拮抗剂PD98059 2μ 1(0.2μg)在5 min脑缺血前20 min侧脑室注射;Anisomycin组(AN):JNK激动剂Anisomycin 2 mg/kg在5 min脑缺血前1h腹腔注射;Poly B组(PB):JNK拮抗剂Poly B 4 mg/kg在5 min脑缺血前40 min腹腔注射给药,同时设立工具药溶媒对照组(DMSO组).各组根据再灌注15 min、2 h、4 h、6 h、1 d、3 d、5 d、7 d又分8个亚组,每亚组6只动物.在预定时间点行开阔法行为学检查、组织形态学检查、TUNEL法检测海马CA1/3区凋亡细胞、免疫组织化学SP法测定p-ERK和p-JNK在海马区的变化.结论:激活ERK和抑制JNK均不同程度地减少缺血海马神经元损伤,模拟IP的部分保护效应,而抑制ERK、激活JNK均可加重神经元损伤,进一步说明IP可能通过激活ERK、抑制JNK而保护海马细胞.第三部分 缺血预处理、ERK及JNK特异性拮抗剂对缺血再灌注损伤海马神经元Fos、Jun蛋白表达的影响目的:观察ERK、JNK下游底物Fos、Jun蛋白在脑缺血及预处理中的表达及作用.方法:动物模型同前部分.随机分为PD98059组(PD):PD98059 2μ1(0.2μg)在5 min脑缺血前20 min侧脑室注射;Poly B组(PB):Poly B 4 mg/kg在5 min脑缺血前40 min腹腔注射给药;假手术组(SH)、预处理对照组(IC)、缺血预处理组(IP)及脑缺血再灌注组(IR)同第一部分.同时设立两工具药溶媒对照组(DMSO组),各组根据再灌注时间点分为以下亚组:h 15 min、Ir 2 h、h 4 h、Ir 6 h、Ir 1d、IR 3 d、Ir 5 d、Ir7d.免疫组织化学SP法动态测定Fos、Jun蛋白在各时间点的变化.