牛呼吸道疾病综合征（BRDC）是目前乃至以后严重危害世界养牛业、造成各国养牛业重大经济损失的重大疾病之一。该病是由多种因素引起，包括环境应激条件、多种病毒、细菌和牛支原体等病原微生物，导致以呼吸道疾病为主的综合征。诱发该疾病的病毒性病原主要有：牛疱疹病毒1型（BHV-1），牛副流感病毒3型（BPIV-3）和牛病毒性腹泻病毒/粘膜病（BVDV）三种病毒。这些病原的常规检测方法如病毒分离等费时耗力、检出力低，不适应临床及时诊断和防控的需要。因此，有必要针对上述病原建立快速准确诊断方法。　　本研究的目的是针对牛副流感病毒3型（BPIV-3）和牛病毒性腹泻病毒/粘膜病（BVDV）两种RNA病毒，建立双重RT-PCR快速诊断方法和抗原抗体检测方法，为我国控制消灭牛呼吸道疾病综合征提供诊断手段。研究内容主要如下：在抗原水平，针对牛副流感病毒3型（BPIV-3）和牛病毒性腹泻病毒/粘膜病（BVDV）两种RNA病毒的特异保守区段设计引物，建立牛病毒性腹泻/粘膜病病毒-牛副流感病毒-3型双重RT-PCR检测方法，并通过临床病料检测来验证检测效果。抗体水平方面，纯化牛副流感病毒3型（BPIV-3），制备和筛选了抗牛副流感病毒3型（BPIV-3）的单克隆抗体；制备纯化了抗牛副流感病毒3型（BPIV-3）的多克隆抗体.为接下来建立夹心ELISA检测方法奠定良好的基础。　　1.牛病毒性腹泻/粘膜病病毒与牛副流感病毒-3型双重RT-PCR检测方法的建立和初步应用　　针对牛病毒性腹泻病毒（BVDV）基因组中E2基因和牛副流感病毒3型（BPIV-3）基因组中NP保守区域的两对引物，建立了BVDV-BPIV-3双重PCR的快速诊断方法。对参考病毒进行梯度稀释检测，结果证明该方法检测BPIV-3和BVDV的灵敏度达96pg。对其他呼吸道病毒和细菌的检测呈阴性。并用建立的双重RT-PCR检测来自湖北、山东、内蒙、大连等地区屠宰场采集的731份牛呼吸道病料进行临床检测。并随即选取检测样本和商业化试剂盒的检测结果进行分析，与IDEXX BVDV抗原检测试剂盒检测结果进行符合率结果，阴性符合率达98.6%，表明双重RT-PCR的特异性高。　　2.牛副流感病毒-3型单克隆抗体、多克隆抗体的制备以及鉴定　　利用超离纯化BPIV-3病毒液作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，按常规方法制备BPIV-3病毒单克隆抗体。获得2株单抗隆抗体杂交瘤细胞，命名为1F5和3D6，单抗腹水效价为5.12×104（1F5）和6.4×103（3D6），单抗相对亲和力分别为104和106。　　同时免疫日本大耳白兔制备纯化抗BPIV-3的多克隆抗体，经测定多克隆抗体的效价为2.56×104。对制备的针对BPIV-3单、多克隆抗体进行了纯化鉴定，为后续建立BPIV-3病毒的夹心ELISA检测方法奠定基础。