芦笋皂苷的提取、纯化及其溶血活性研究

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芦笋皂苷是一类具有环戊烷多氢菲母核结构的物质,其具有多种生物活性,高效的提取工艺和纯化工艺可为开发芦笋皂苷类药物和保健品奠定良好的基础。但芦笋皂苷属于甾体皂苷,甾体皂苷通过静脉注射作为药物使用时,会有溶血现象,这一特性大大限制了芦笋皂苷的应用。本文主要研究了芦笋皂苷含量测定的方法,提取纯化工艺,并通过体外实验对其溶血进行了评价,以及初步探讨了芦笋皂苷的结构。通过上述实验,得出以下结论:1、建立测定芦笋总皂苷含量的分光光度测法,选用菝葜皂苷元为对照品,比较硫酸-甲醇法、香草醛-高氯酸-冰醋酸法以及高氯酸法三种不同显色剂对芦笋皂苷反应适宜性,选用高氯酸法为芦笋总皂苷的含量测定方法。在310nm下,芦笋总皂苷及菝葜皂苷元均有最大吸收,菝葜皂苷元在72~216μg范围内有良好线性关系。此方法简便、准确,适合于芦笋总皂苷含量的测定。2、采用Box-Behnken设计和响应面分析法,对芦笋总皂苷的超声辅助提取工艺进行优化。以提取温度、提取时间及超声功率为自变量,芦笋总皂苷得率为响应值,研究各自变量及其交互作用对超声波辅助提取法提取芦笋总皂苷得率的影响。结果表明:最佳工艺条件为乙醇浓度95%、提取温度71℃、提取时间23min、超声波功率70W、提取次数2次,在此条件下获得总皂苷的提取率为23.96mg/g。3、采用静态及动态吸附解吸试验优选适宜于芦笋皂苷纯化的大孔树脂并优化纯化条件。结果表明:S-8型树脂对芦笋皂苷有较好的吸附和洗脱效果,并具有良好的脱色效果,其最佳纯化条件为:上样浓度1mg/mL,上样量60ml/g树脂,用pH=7的75%的乙醇洗脱,洗脱剂用量为10mL/g树脂。纯化后得提取物中芦笋皂苷的纯度可达50.15%,脱色率为92.23%。4、本文采用肉眼观察法和分光光度法两种方法对芦笋皂苷的溶血性进行了评价。实验结果表明,芦笋皂苷的溶血性具有剂量依赖性,芦笋皂苷在浓度低于25 ug·mL-1时,溶血率<5%,作为注射用药不会引发溶血现象。5、本文通过泡沫实验、Libermannn Burchard反应、Ehrish试剂反应、以及红外光谱图谱共同鉴定表明芦笋皂苷具有甾体皂苷的母核结构,并属于开环的呋喃型甾体皂苷类。
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