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目的通过巢式PCR、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显色技术,检测肝细胞癌(HCC)及肝局灶性结节性增生组织(FNH)中分别位于6条染色体上11个具有高度多态性的微卫星位点杂合性丢失(LOH)的状态,分析HCC及FNH中上述位点LOH的发生频率,并分析LOH与HCC临床及病理指标之间的关系,进一步探讨特定的LOH与HCC发生、发展的关系,以期为肝癌的早期诊断、预后预警提供新的分子标志物。。方法1标本收集44例肝癌组织取自病理科2006年1月-2008年10月存档的蜡块组织,42例变异肝细胞结节组织取自病理科存档的局灶性结节性增生标本,每例标本均经组织学检查,经两位有经验病理医师确诊。2微卫星引物引物的序列来自Genbank提供的资料。11个微卫星基因座:D1S199(1p36.13),D1S507(1p36.1),D1S2843(1p36.1),D6S1008 (6 q26),D8S261(8p22-p21.3) , D8S277(8p23.3-p22) , D8S298(8p21) , D8S1819(8p23.1),D10S215(10q23),D11S1301 (11p13),D16S402(16q24-2-q24-3)。3 DNA提取各标本石蜡包埋后制备15μm切片8张,用于显微切割技术收集组织。等体积酚-氯仿法抽提DNA,终浓度50ng/mL。4微卫星多态性分析选11个位点进行巢式PCR。PCR反应总体积50μl,采用Bio Rad热循环仪。将4μlPCR产物与等体积上样缓冲液混匀,加样到8%变性聚丙烯酰胺凝胶,120V泳动4h。银染后观察结果,分别用UVP凝胶分析系统和光学照相记录数据。结果44例HCC中,35例在至少一个位点发生LOH,其中5例在所有能够提供信息的位点均发生LOH。发生LOH的总频率为79.55% (35/44);其中D11S1301的LOH率最高为64.29%(27/42),其次为D1S2843(62.50%,25/40)和D16S402(54.76%,23/42)。从总体上看,LOH与性别、年龄、血清AFP、HBsAg、肿瘤大小、Edmondson分级、肝硬化、转移等临床病理学参数无明显关系。但某些特定位点的LOH与HCC临床病理学特征的相关性有统计学意义。在D8S261、D1S2843位点,HBsAg阳性HCC的LOH频率显著高于HBsAg阴性者(P值分别为<0.05和<0.01);D1S507,D11S1301位点,肿瘤直径>3cm的LOH率显著高于直径≤3cm组(P值分别为<0.05和<0.01);在D11S1301位点,Edmondson分级Ⅲ-Ⅳ的肿瘤LOH显著高于Ⅰ-Ⅱ级的肿瘤(P <0.01);D16S402基因位点,肝内转移者的LOH明显高于无肝内转移者(P <0.05)。42例变异肝细胞结节组织有其中2例在D11S1301位点存在LOH,LOH率为4.76%,其余位点均未见LOH发生。结论特定基因位点的LOH与HCC的发生、发展及临床和病理学参数密切相关。本研究发现,HCC中发现染色体11p13区D11S1301位点LOH发生率高,提示可能存在与肝癌发生发展相关的新的肿瘤抑制基因,为进一步研究肝癌的肿瘤抑制基因提供了重要的依据和线索。研究中发现特定位点的LOH与HBsAg阳性HCC的发生、HCC的恶性程度及侵袭转移等预后因素相关,为HCC的个体化诊疗及预后预警提供了新的理论依据,具有重要的临床意义。同时,在42例肝变异肝细胞结节组织中,2例在D11S1301位点存在LOH,LOH发生率为4.76%,这一结果显示部分局灶性结节性增生组织已经与肝癌组织有相同位点的LOH,从分子遗传学水平提示肝局灶性结节性增生与HCC的发生相关,可能是一种早期癌前病变,为HCC的早期诊断提供了新的理论依据。