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背景和目的
化疗是肿瘤内科治疗的的主要手段。尤其是近几十年,随着高效细胞毒药物的不断问世,化疗疗效不断提高。但由于细胞毒药物作用靶点多为增殖较快的细胞DNA,它们在抑制肿瘤进展的同时不可避免地给患者自身的组织和器官带来一定的毒性,有些甚至是致命性的。为了避免细胞毒药物的不良反应,近十余年来国内外逐渐兴起分子靶向药物的研究热潮,并取得了长足进展。这些分子靶向药物主要从分子水平上特异性地作用于肿瘤细胞或肿瘤组织中的细胞信号转导通路、细胞因子及其受体等,对正常的组织和器官影响较小,表现出高效低毒的特征。
CXCR4分子为高度保守的G蛋白跨细胞膜蛋白受体,在肿瘤细胞表面普遍表达,在肿瘤缺氧的微环境中,肿瘤细胞CXCR4的表达会上调。CXCR4与其唯一配体CXCL12(SDF-1,stromal-dervied factor-1)相互作用参与肿瘤的增值、血管生成、转移等恶性生物学行为。因此,我们设想应用一种特异性的CXCR4拮抗剂(AMD3100)阻断CXCR4/CXCL12轴可能会起到抑制肿瘤进展的作用。
既往研究表明肿瘤所分泌的一些“肿瘤来源的因子”能够动员骨髓中的大量幼稚细胞出髓。这些幼稚细胞处在不同的分化阶段,在荷瘤鼠外周血和脾脏共表达CD11b,Gr1分子,对荷瘤鼠免疫起着抑制作用,被称为“髓源抑制性细胞”。
AMD3100通过阻断骨髓造血细胞上表达的CXCR4分子与其配体CXCL12结合,动员人和鼠类造血干细胞出髓,同时可能影响T、B淋巴细胞通过CXCR4受体向淋巴组织和胸腺内的特定微环境发生归巢和从这些器官内的特定的微环境中游出,进而影响其发育成熟和执行免疫监视功能。这些动员出髓的大量的幼稚细胞在荷瘤鼠外周血及脾脏积聚可能也表现出“髓源抑制性细胞”的特征抑制患者免疫。
因此,我们利用荷Lewis肺癌小鼠及高表达CXCR4的Lewis肺癌为研究对象,观察向荷瘤鼠腹腔连续注射AMD3100后对Lewis肺癌进展及荷瘤鼠脾脏“髓源抑制性细胞”积聚的影响,探讨CXCR4是否是很好的分子作用靶点,为临床研发分子靶向药物提供依据。
材料和方法:
60只皮下接种Lewis肺癌细胞的C57BL/6小鼠随机分为两组,即PBS组和AMD3100组,每组均30只。PBS组荷瘤鼠腹腔只注射PBS液0.2ml/只。AMD3100组荷瘤鼠腹腔注射溶解有AMD3100[2mg(kg·d)]的PBS液0.2ml/只。两组荷瘤鼠均每日腹腔注射一次,持续26天。隔日测两组荷瘤鼠体重,记录成瘤时间,观察小鼠饮食、活动等一般状况。26天后完全随机法处死两组荷瘤鼠各15只,剥离瘤体称重并进行常规组织学观察,观察各组小鼠Lewis肺癌肺转移灶数目。用免疫组化方法测定两组小鼠瘤组织微血管密度。流式细胞术测小鼠脾脏MDSCs比例。最后统计两组剩余荷瘤小鼠自然生存天数。实验数据采用SPSS16.0统计软件进行统计学处理。对两样本均数进行独立样本t检验:生存率及单因素生存分析分别采用Kaplan-Meier和Log-rank法检验。以α=0.05作为检验水准。
结果:
1.PBS、AMD3100两组小鼠Lewis肺癌成瘤时间分别为(8.03±1.47),(9.97±1.50)天;接种瘤细胞后26天瘤质量分别为(3.54±0.93),(2.09±0.66)克。差异均有统计学意义(P<0.05)。Lewis肺癌肺转移灶在肺脏表面为类圆形凸起结节,大结节多红润,小结节如“水泡”状。PBS组小鼠Lewis肺癌肺转移灶数目为(18.27±9.78)个/只,AMD3100组小鼠Lewis肺癌肺转移灶数目为(7.40±5.83)个/只。差异有统计学意义(P<0.05)。
2.PBS、AMD3100两组小鼠接种Lewis肺癌细胞后体质量分别为(17.36±0.51),(17.43±0.53)克。成瘤前8天两组小鼠进食量无减少,体质量无减轻,均较机敏、活泼,无精神萎靡表现。第8天,两组小鼠体质量分别为(17.26±0.53),(17.32±0.59)克。两组小鼠体质量差异均无统计学意义(P>0.05)。26天后PBS组荷瘤鼠精神状态不如AMD3100组,表现出精神萎靡、活动度减少、反应迟钝。PBS、AMD3100两组荷瘤鼠最初出现死亡时间分别为皮下接种瘤细胞后第27、29天,中位生存时间分别是第29、34天。两组小鼠生存期差异有统计学意义p<0.05)。
3.PBS组Lewis肺癌剥离后表面红润、质脆、剖开后出血较多;AMD3100组Lewis肺癌剥离后表面苍白、质韧、剖开后几乎无出血。两组小鼠Lewis肺癌微血管密度分别为(41.40±6.44),(32.47±5.33)个/HP。两组瘤组织微血管密度差异有统计学意义(P<0.05)。
4.PBS组荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞比例为(19.57±3.59)%,AMD3100组荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞比例为(31.42±5.04)%。差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1.AMD3100使Lewis肺癌移植瘤成瘤时间延迟且生长和肺转移受到抑制。
2.AMD3100对荷瘤小鼠无明显毒性反应且使荷瘤鼠生存期延长。
3.AMD3100对Lewis肺癌移植瘤血管生成具有抑制作用。
4.AMD3100使荷瘤鼠脾脏髓源抑制性细胞积聚增加,可能对荷瘤鼠免疫具有一定的抑制作用。