广西猪源副粘病毒Guangxi株全基因的测序分析及生物学特性研究

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猪的副粘病毒病是由副粘病毒科病毒引起的一类猪的热性传染病,包括尼帕病毒病、“蓝眼病”、梅那哥病毒病等。1999年以来我国许多省市报道在猪体内也能分离到副粘病毒,经过鉴定,证实流行于我国境内的猪副粘病毒病是由猪源禽I型副粘病毒引起的。本实验通过RT-PCR从广西14个地市的732份发病猪组织中检出1株阳性样品,经鸡胚接种、血凝抑制实验、BLAST序列比对等方法分离、鉴定出1株猪源禽I型副粘病毒,命名为Guangxi株。对Guangxi株进行最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄维鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定试验,其MDT值和ICPI指数分别为60小时和1.53; Guangxi株F蛋白112-117位裂解位点氨基酸序列与强毒株一致,均为R-R-Q-R-R-F; HN基因编码的氨基酸长度也与强毒株一致;小鼠在接种病毒104小时后开始出现死亡,112小时内8只小鼠全部死亡,而60日龄猪接种lmL病毒后无任何异常表现,但接毒20天后产生特异性抗体,效价为71og2~91og2。上述结果表明分离到的猪源禽I型副粘病毒Guangxi株为强毒株。参照GenBank中己发表的新城疫全基因序列,设计9对引物,以鸡胚尿囊液提取的病毒总RNA为模板,扩增出9段含有整个基因的相互重叠的序列,经克隆、测序、拼接后,得到了Guangxi株的全基因序列。序列显示,分离到的广西猪源副粘病毒Guangxi株基因组由15,192个核苷酸组成,遵循“six of rule”原则,从基因的3’端至5’端依次排列着3'UTR,结构基因NP、P、M、F、HN和L编码区,以及5‘UTR。使用DNAStar分析软件分别进行各个基因的核苷酸和氨基酸同源性分析比较和系统进化树的绘制。6个基因的核苷酸同源性和氨基酸同源性最高值分别在94.4%~99.6%和91.4%'~99.2%之间;系统进化树分析显示,Guangxi株属于基因II型进化分支,与广东2007年鸡源新城疫毒株、广西2003年鸡新城疫毒株、河北2007年鸡新城疫毒株在同一个分支。
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